Catalase Koncentration Måling: Metoder & Betydning

Katalase er en biologisk (organisk) katalysator. Dette enzym er en af de mest potente kendte katalysatorer og har gavnlige effekter på den menneskelige krop og er afgørende for livet. Katalase virker som en katalysator i at accelerere nedbrydningen af hydrogenperoxid. Hydrogenperoxid er et metabolisk biprodukt, der er giftigt for cellerne, hvis det ikke fjernes. Katalase hjælper med at bryde hydrogenperoxid ned til vand og ilt. Katalase hjælper også med at oxidere andre giftstoffer såsom fenoler, myresyre, formaldehyd og alkoholer.

Det du har brug for

• To 110 mL kromogen i phosphatbuffer
• 300 µL substrat - 30% hydrogenperoxid
• 400 µL HRP - horseradish peroxidase i phosphatbuffer
• 60 mL phosphatbuffer
• 250 mL prøve fordyningsmiddel surfactant i phosphatbuffer
• To 30 mL substrat fordyningsmiddel phosphatbuffer
• To 30 mL stop reagens - natriumazid
• To vialer 160 U/vial standard katalase
• Spektrofotometer
• 10 µL justerbare pipetter
• 1 cm bane-længde spektrofotometrisk kvetter
• 1,5 mL polypropylen mikro-rør med dæksel
• Prøverør - 12x75 millimeter (2,5 mL hver)
• Timer
• Deioniseret vand

Instruktioner

1. Forbered katalase-lageret, du vil måle, ved at tilføje 200 mikroliter (µL) deioniseret vand til katalase-koncentrationerne i 50 milliliter (ml) vialer. Katalase-koncentrationens niveau bør være 160 enheder per milliliter (U/ml).
2. Tilføj 30 µL fordynet katalase i rør. Tilføj 500 µL af substratet (hydrogenperoxid - 10mm H2O2) i hvert rør. Vær forsigtig med at ikke splaske hydrogenperoxidet, når du arbejder med det.
3. Inkubér hvert enkelt rør i et minut ved stuetemperatur.
4. Tilføj 500 µL reagens til hver vial. Sæt dæksel på hver vial og bland ved at vende vialen op og ned. Ryst ikke blandingen, ryst vialen eller rør den med et objekt.
5. Tilføj 20 µL af hver reaktionsblanding i prøverørne. Tilføj 2 milliliter HRP reagens i hvert prøverør. igen, bland løsningen ved at vende prøverørne flere gange.
6. Inkubér løsningen igen, denne gang i 10 minutter ved stuetemperatur.
7. Læs absorbansniveauet af løsningen med et spektrofotometer. Spektrofotometeret måler lysbølgelængder for at bestemme præcist, hvilke stoffer der er til stede, og i hvilke koncentrationer. Denne metode vil give en præcis avlæsning af katalase-koncentrationerne. Informationen er nyttig i konteksten af katalase interaktion med hydrogenperoxid, som i dette eksperiment, og som sker naturligt i den menneskelige krop.