|  | Sundhed og Sygdom >  | Kost og ernæring | Makrobiotisk diæt

Dyrkning af Clostridium perfringens: Vækstkrav, medier & sikkerhedsprotokol

Clostridium perfringens er en Gram-positiv, anaerob, spore-dannende basillus — en førende årsag til fødevarebåren sygdom (enterotoxin type A) og gasbrand. Laboratorie-dyrkning kræver streng anaerob teknik.

Vækstkrav

ParameterOptimal intervalNoter
AtmosfæreStrengt anaerob (<0,5% O2)Anaerob kammere, GasPak-glas, anaerobe poser, præreducerede medier
Temperatur37°C (optimal); interval 15–50°CHurtig vækst: fordoblings tid ~8–10 min ved 37°C
pH6,0–7,5 (optimal 6,5–7,0)Syreproduktion sænker pH; buffering vigtigt
Gassammensætning10% CO2, 90% N2 (eller 85% N2, 10% CO2, 5% H2)H2 til katalytisk O2-fjernelse i kamre
Inkubations tid18–24 timer for kolonier; 48t for sporuleringHurtig dyrker — kolonier 2–4 mm ved 24t

Dyrkningsmedier

Berigede ikke-selektive

  • Hjerne-hjerte-infusion (BHI) Bouillon/Agar: Rig, understøtter robust vækst
  • Kogt kød-medium (RCM): Klassisk for anaerobier; heme, reducerende agenter; viser "stormy fermentation" (gas)
  • Hakket kød-glukose-bouillon: Alternativt reducerende medium

Selektive/differentierende

  • Tryptose-sulfat-cycloserin (TSC) Agar: Selektiv for C. perfringens; sorte kolonier (H2S + sulfat-reduktion)
  • Shahidi-Ferguson Perfringens Agar (SFP): Selektiv; sorte kolonier med opaque halo (lecitinase)
  • Æggeblomme-agar (Nagler): Detekterer lecitinase (alfa-toxin) — opaque halo

Identifikations-workflow

  1. Gram-farvning: Gram-positive stængler, subterminale sporler (bulging)
  2. Anaerob vækst på BHI + aerob ingen vækst (obligat anaerob bekræftelse)
  3. "Stormy fermentation" i RCM (gasbobler i kød)
  4. Lecitinase + på æggeblomme-agar
  5. Nagler-reaktion: antitoksin neutraliserer halo
  6. Hurtig: Omvendt CAMP-test (C. perfringens + Gruppe B Strep → forstærket hæmolysse)
  7. Toxin-typing (A-F): PCR for cpa, cpb, etx, iap, netB gener

Kritiske sikkerhedsforanstaltninger

  • BSL-2 praksis: Laboratoriekjole, handsker, øjenbeskyttelse; BSC for aerosol-genererende procedurer
  • Spor-fare: Sporer modstår varme (75°C × 10 min), ethanol, mange desinfektionsmidler. Brug 10% chlor (0,5% hypoklorit) eller spor-døende agenter.
  • Toxin-risiko: Enterotoxin (type A) varmelabil (60°C × 10 min); men kulturer kan indeholde spor
  • Affald: Autoklav 121°C × 30 min før affaldshåndtering
  • Ingen lugtprøvning: Karakteristisk "stormy" lugt men aerosol-risiko

Kvalitetskontrol

  • ATCC 13124 (type A) eller 3624 som positive kontroller
  • Aerob kontrolplade (skal vise ingen vækst)
  • Medium-sterilitetschecks

Streng anaerob teknik og spor-bewussthed er ikke-forhandelbare for sikker, pålidelig C. perfringens-dyrkning.

Makrobiotisk diæt