Kan du bruge serum til at udføre en western-blot?

Selvom det er muligt at bruge serum til at udføre en Western blot, anbefales det generelt ikke. Serum er en kompleks blanding, der indeholder celler og proteiner, inklusive dem, der kan interferere med påvisningen af ​​specifikke proteiner af interesse. Derudover kan serum have et højt baggrundssignal, hvilket kan gøre det vanskeligt at påvise proteiner med lav overflod. Af disse grunde anvendes oprensede proteinprøver typisk i Western blots.

I visse tilfælde kan det dog være nødvendigt eller fordelagtigt at bruge serum til Western blotting. For eksempel, hvis proteinet af interesse er til stede i lav overflod i den oprensede proteinprøve, kan brug af serum øge chancen for at påvise proteinet. Derudover kan serum bruges til at studere protein-protein-interaktioner eller til at påvise antistoffer mod specifikke proteiner.

Hvis serum skal bruges til Western blotting, er det vigtigt at tage skridt til at minimere risikoen for interferens og baggrundssignaler. Disse trin kan omfatte:

* Klargøring af serumprøven ved centrifugering for at fjerne celleaffald og uopløselige partikler.

* Fortynding af serumprøven for at reducere koncentrationen af ​​forstyrrende stoffer.

* Brug af et blokeringsmiddel, såsom bovint serumalbumin (BSA), for at minimere uspecifikke interaktioner.

* Optimering af Western blotting-betingelser, såsom antistofkoncentrationer og inkubationstider, for at reducere baggrundssignalet.

Generelt anbefales det at bruge serum til Western blotting generelt ikke på grund af potentialet for interferens og baggrundssignaler, men det kan være nødvendigt eller fordelagtigt i visse tilfælde. Omhyggelig optimering af Western blotting-betingelserne er afgørende, når du bruger serum.