Mikrosom-protokol: Vejledning til læmestoftskifte-forskning

Leverens mikrosomer

Leveren spiller en stor funktion i transformationen af læmestoffer i kroppen. Mikrosomer er subcellulære fraktioner af levervæv. Specifikke procedurer, kaldet protokoller, er nødvendige for forskere til at studere mikrosomer, enzymers og læmestoft-interaktioner.

Basal protokol

Protokollen involverer tilføjelse af forbindelser til mikrosomer med og uden en elektronbærer. Prøver tages på forudbestemte tider og centrifugeres. Resultaterne med og uden elektronbærer sammenlignes.

Variation i centrifugering

Mens de vigtigste elementer af protokollen kan forblive de samme, kan variationer i nogle trin resultere i forbedrede resultater. Resultaterne sammenlignes for at revidere protokollen. I et tilfælde varierede centrifugeringskraften. Resultaterne indikerede, at ved at reducere kraften, øgedes mikrosomernes renhed.

Variation i bufferløsninger

Levercellerne fordybes generelt med en bufferløsning i et trin kendt som homogenisering. En forskningsvej har været tilstedeværelsen og fraværet af sukrose i løsningen. Resultaterne angiver, at når sukrose er til stede, øges reduktase-aktiviteten, ifølge studier udført af Center for Human Toxicology, Department of Pharmacology and Toxicology ved University of Utah. Reduktase er et enzym, der tjener til at katalysere organiske reaktioner ved at reducere den nødvendige aktiveringsenergi.

Variationer i homogenisering

Blandingen af celler med en bufferløsning opnås ved at ryste løsningen og cellerne i et rør manuelt. Når ti rystninger bruges til at blande løsningen i stedet for seks eller otte, øges reduktase-aktiviteten.

Mikrosomale incubationsforsøg er standard i farmakokinetik for at forudsige humant lever-metabolisme (in vitro-in vivo ekstrapolation). CYP450-enzymers aktivitet er central.