Lever-ekstrakt i Ames-test: Rolle i metabolisk aktivering af promutagener

Formålet med Ames-testen

Ames-testen bruger Salmonella typhimurium stamme til at detektere mutagene forbindelser. Mange kemikalier (promutagener) kræver metabolisk omdannelse for at blive mutagene.

Lever S9-fraktion

• Fremstillet fra gnaver-lever induseret med Aroclor 1254 eller phenobarbital.
• Indeholder Fase I enzymer (CYP450'er, FMO'er) og Fase II enzymer (GST, UGT, SULT) plus kofaktorer (NADPH, UDPGA, PAPS, GSH).
• Efterligner mammalisk hepatisk metabolisme in vitro.

Hvordan det virker

1. Test-forbindelse + bakterier + S9-blanding + kofaktorer → inkubation.
2. Enzymer omdanner promutagen → reaktiv elektrofil.
3. Elektrofil skader bakteriel DNA → revertant kolonier (his⁺).
4. Dosis-respons-forhold indikerer mutagen potentielle.

Betydning

Uden S9 detekteres kun direkte virkende mutagener. Med S9 identificerer testen forbindelser, der kræver metabolisk aktivering (fx aflatoxin B1, benzo[a]pyren, 2-acetylaminofluoren). Det er en regulatorisk standard for genotoxicitet-screening.