CFU-protokoller: Måling af levedygtige mikroorganismer – Bioteknologisk forskning

Hvad er CFU?

Colony-forming unit (CFU) er et mål for mikroorganisme-tal. I modsætning til andre metoder, som f.eks. direkte mikroskopisk, hvor både dode og levende mikroorganismer betragtes, giver CFU-protokoller biologer mulighed for at tælle kun levedygtige celler. Standard måleenheder er colony-forming units per milliliter for væsker og colony-forming units per gram for faste stoffer. CFU-protokoller bruges bredt i bioteknologisk forskning.

CFU-MK Assay til Akut Trombocytopeni Protocol

Megakaryocyt (MK) er en type knoglemarvcelle, der producerer blodplader. Denne protokol bruges i studier om trombocytopeni, en tilstand relateret til lave blodplade-tal. Før tællingen forberedte teknikere CFU-MK assay med humane navlestrengs-blodceller, Iscoves modificerede Dulbeccos medium, bovin kollagen-løsning, serumfrit medium med proteiner kaldet cytokiner, antistoffer anti-TNP, anti-GPIIb/IIIa og anti-mus IgG, Evans blå modfarve, Tris/NaCl-buffer og bovin serum albumin.

Colony Assay Mix Protocol

Teknikere forbereder denne assay med human plasma, kemikaliet 2-mercaptoethanol, leukocyt-betinget media, hormonet erythropoietin og Iscoves Modified Dulbeccos medium, ifølge Jeffrey W. Pollard i "Basic Cell Culture Protocols." Denne løsning blandes derefter med celleprøverne, der skal analyseres. Methylcellulose tilføjes, og prøverne inkuberes i en fugtig atmosfære med 5 procent karbondioxid i 14 dage.

Migration af CFU i CD34 Celler

CD34, eller differentierings-molekyler, er til stede på visse humane immunforsvars-celler, der fungerer som kontrolleret adhæsions-faktor på cellemembraner. Celler, der indeholder dette protein, kan have evnen til at migrere fra ét væv til et andet. Under denne protokol vasker teknikere prøver af CD34-migrerede celler for at fjerne cytokin-proteiner. Prøverne centrifugeres derefter og genoplosser i et medium med vækstfaktorer. Kolonier tælles to uger senere.