Metoder til måling af NADPH - oxidase

Enzymet NADPH oxidase er identificeret som en producent af reaktive ilt arter i løbet af processer, herunder væksten af ​​vaskulære glatte muskelceller. Disse reaktive arter er knyttet til en række sygdomme , herunder forhøjet blodtryk , diabetes, kræft og inflammation , metoder til overvågning af aktiviteten af ​​dette enzym er afgørende for mulig udvikling behandling . NADPH oxidase

NADPH oxidase tilhører en familie af enzymer , der bistår med elektron overførsel mellem NADPH og ilt. Men NADPH oxidase har den unikke evne til at producere reaktive ilt arter fra denne reaktion sammenlignet med andre familiemedlemmer , når reaktive ilt arter genereres via andre midler. Multimer protein kompleks , NADPH oxidase består af membranbundne flavocytochrome B558 , der bruges som en måling markør .
Reactive Oxygen Species ( ROS) Generation
p Som hovedkilden til ROS, især hydrogenperoxid, NADPH oxidase producerer små , ​​men konsekvente mængder via sin isoform udtrykt i blodkar , som er involveret i signalering processer. Denne ensartet produktion i sidste ende kan overvælde naturlig antioxidant system, der forårsager et tab af beskyttende forbindelser såsom nitrogenoxid , og generering af endnu mere kraftfuld ROS .
Kemiluminescensmetode

Chemiluminescence muliggør yderst følsom , automatiseret måling af NADPH oxidase aktivitet i en række koncentrationer . Under denne fremgangsmåde NADPH substrat tilsat til en vævsprøve , der indeholder NADPH-oxidase . Efter reaktionen ROS genereret og reagerer med forbindelsen lucigenin at producere en chemilluminescent effekt, der måles. Luminescens er direkte proportional med NADPH oxidase aktivitet, da enzymet bestemmer hastigheden af ​​reaktionen.
Kinetic Assay via flowcytometri

I denne metode, er vævsprøver analyseret via flowcytometri. Knoglemarv er adskilt fra prøven under anvendelse af Hanks Balanced Salt Solution. Specifikke pletter og påvisning af antistoffer føjes til prøven i polystyrenrør . Prøven inkuberes derefter , vaskes med Hanks ' Balanced Salt Solution, mærket med molekylære sonder og fremstillet af flowcytometri. Kontrol rør er også lavet til sammenligning og til at kalibrere flowcytometret . Maskinen er så løb og målinger registreres.
Hoteltilbud