DNAzol-protokol: Genomisk DNA-isolering og sikkerhedsguide

DNAzol-protokol

DNAzol er et kommercielt, patenteret produkt, der tillader isolering af genomisk DNA i prøver fra enten dyr eller planter. På grund af løsningens ætsende natur, skal strenge sikkerhedsprocedurer overholdes gennem hele isoleringsprotokol-processen.

DNAzol-protokol trin

Der er flere sekventielle trin i DNAzol-protokollen; væv homogeniseres og derefter centrifugeres hvis nødvendigt for at fjerne fragmenter. DNA isoleres herefter kemisk og vaskes med ethanol og kemikaliet fjernes. Endelig gennemgår prøven opløsning ved brug af vand alene eller en kemisk og vand-blanding for at accelerere processen.

Forbedret homogenisering

Homogenisering af dyrevæv kan forbedres ved brug af DNAzol Reagent. Det bør kun tage fem til ti rystninger med en håndholdt homogenisator. Bløde væv kan reduceres til mindre fragmenter og behandles med en mikropipet.

Plantevæv

Plantevæv kan pulvriseres ved brug af tørris og ethanol eller flydende kvælstof før ekstraktion.

Påkrævet centrifugering

Mens centrifugering generelt er valgfri, hvis overdreven præparation før præcipitation er nødvendig, så er centrifugering påkrævet før fortsættelse.

DNAzol (guanidin-thiocyanat-baseret) giver hurtig DNA-ekstraktion uden fenol/kloroform. Sikkerhed: handsker, briller, afvogningshud pga. giftighed. RNA-kontamination mulig – DNase-behandling kan kræves.