Tris-Tricine-buffer: Anvendelser og protokoller i molekylærbiologi

Hvad er Tris-Tricine?

Tris-tricine er et hvidt krystallocet pulver, der bruges i molekylærbiologiske laboratorier som en buffer-løsning. Denne organiske forbindelse er opløselig i vand, har et lavt surhedsniveau og bruges i videnskabelige procedurer, såsom gel-elektroforese, til at buffere eller balancere pH-værdien af analyserede løsninger. Tris-tricine-protokoller inkluderer SDS-PAGE i en Tris-tricine-buffer, Tris-tricine-gel til elektroforese og adskillelse af lav-molekylære-vægt-proteiner.

SDS-PAGE i en Tris-tricine-buffer

Polyacrylamid-gel-elektroforese med detergenten natrium-dodecyl-sulfat er en meget brugt teknik til lille-skala adskillelse af proteiner, siger G. Brent Irvine, forsker ved Queen's University Belfast, i "Neuropeptide Protocols." Teknikere opløser acrylamid i vand, holder løsningen ved 39,2°F (4°C). Senere tilføjer de Tris-tricine, hydrogenchlorid, mercaptoethanol og SDS for at sammensætte gellet. Molekylærbiologer kan bruge dette gel i elektroforese-apparatet, som er specielt designet til at adskille proteiner.

Tris-tricine-gel

Denne protokol henviser til forberedelse af Tris-tricine-gel til brug i generelle elektroforese-eksperimenter, ifølge University of Washington. Teknikere blander acrylamid-løsning, Tris-tricine, klor, SDS og dobbelt-destilleret vand. De tilføjer derefter glycerol for at adskille gellet kun og fjerne den gas, der opstår i løsningen under vakuum i op til 15 minutter. De tilføjer ammoniumpersulfat og tetrametyletylendiamin og rører for at blande. Til sidst tilføjer de vand-mætet isobutyl-alkohol til gellet.

Adskillelse af lav-molekylære-vægt-proteiner

Tris-tricine er en vigtig komponent i adskillelsen af lav-molekylære-vægt-proteiner, siger Ian M. Rosenberg i "Protein Analysis and Purification: Benchtop Techniques." For at forberede elektroforese-Tris-tricine-løsningen tilføjer teknikere TEMED, farvestoftet coomassie-blå, gelterne acrylamid og bisacrylamid, hydrogenchlorid, glycerol og SDS. Gelificerings-processen er afsluttet inden for en time. Protein-prøver inkuberes ved 104°F (40°C) i 30 minutter, før elektroforese-analyse.