Cell Lysis Protokol for Protein Isolation

Små proteiner kan fremstilles syntetisk , men af mange grunde er der ingen syntetisk maskineri bedre end selve cellen . Typisk er det første skridt i protein isolation er cellelysis . Cell Lysis
I cellelysering membranen omkring cellen brister .

Ordet " lyse " kommer fra den græske rod " at løsne ". I cellelyse , er de kræfter, der holder cellemembranen sammen afbrydes, får det til at briste . Indholdet af cellen derefter i den omgivende opløsning , herunder proteinet af interesse . Normalt sker dette ved tilsætning af en kemisk opløsning kaldet lysisbuffer .
Forberedelse Lysis Buffer
Valget lysisbuffer vil afhænge af celletypen , proteinet og anvendelse .

Et utal af forskellige lysis løsninger er kommercielt tilgængelige , eller fælles opskrifter kan anvendes til fremstilling af lysisbuffer fra almindelige kemikalier . Den bedste buffer at bruge, vil variere afhængigt af den anvendte celletype , proteinet, der skal isoleres, og den endelige anvendelse , men generelt en lyseopløsning indeholder en detergent -molekyle (ofte NP-40 eller Triton -X) , der opløser cellen membran , sammen med buffere, chelatorer og proteasehæmmere at forhindre proteinet i at blive beskadiget , når frigivet fra den beskyttende miljø i cellen.

lysebetingelser
Udførelse lysis under iskolde forhold forhindrer skader på protein af interesse.

Lysebuffer er normalt bruges iskold og lyserende processen lov til at fortsætte under kolde forhold . Opløsningen forsigtigt rystet for at fremme jævn fordeling af celler og lyse- produkter. Efter 5 til 10 minutter, lyseopløsningen normalt neutraliseres for at forhindre yderligere aktivitet. Disse forholdsregler reducere skader på protein og reducere mængden af uvedkommende vragrester produceres der senere bliver nødt til at blive fjernet.
Andre Lysis metoder kan også bruges
Mekaniske kraft til at lysere cellerne.

Selvom kemisk lysis er den blideste og mest almindeligt anvendte, kan barskere mekaniske metoder til lysering celler anvendes i nogle tilfælde. Heriblandt sonikering gentagne fryse - tø-cykler og homogenisering , hvilket er en mæskningen . Se den tekniske litteratur for at finde den mest hensigtsmæssige metode til din konkrete sag.
Hoteltilbud