Safranin O-farvning: Protokoller og anvendelser i biologisk forskning

Hvad er Safranin O?

Safranin O er et kemisk stof, der bruges i molekylærbiologi som en farve eller farvestoft. Denne farvestoft reagerer med brusk, som er det væv, der danner ører, næse og led; bakterielle endosporer, immunforsvars-svarstoffer kaldet granuler, og nogle proteiner som muciner. Safranin O-protokoller inkluderer brusk-farvning, endospore-farvning og dekalcificeret kondyl.

Brusk-farvnings-protokol

Denne protokol bruges til detektion af brusk; muciner, en type tungt protein produceret i hudvævet; og immunforsvars mastcelle-granuler, lavet af heparin og histamin. Brusk-prøver behandles med formalin og parafin, ifølge IHC World. Teknikere hydraterer prøverne med vand, farver med Weigerts jern-hematoxylin og vasker det af. Derefter farver de prøverne med fast grøn farvestoft og skyller med eddikesyre. De tilføjer 0,1 procent Safranin O-løsning. Efter fem minutter dehydroeres prøverne med ethylalkohol. Mikroskop-observation viser kerner i sort og cytoplasma i grågrønt. Brusk, mucin og mastcelle-granuler er orange til røde.

Endospore-farvnings-protokol

Endosporer er strukturer dannet indeni hvile- eller vegetativ bakterieceller, der tjener som et overlevelses-mekanisme, når organismerne er under stress. Ifølge American Society for Microbiology kan safranin bruges i forbindelse med malachit-grøn farvestoft i studiet af disse vegetative celler. Under mikroskop-observation er endosporerne grønne, mens de vegetative celler er brune-røde eller lyse-røde. Forløb inkluderer varme-fixering af prøver på objektglas, malachit-grøn farvning under en varmekilde, vandtvaske af prøver og farvning med Safranin O i en alkoholisk løsning.

Dekalcificeret-kondyl-protokol

Denne protokol bruges i laboratorie-studiet af dekalcifikation af led eller kondyler. Ifølge Yuehuei An i "Handbook of Histology Methods for Bone and Cartilage," bruges Safranin O i en væsken-løsning til at farve brusk og calcium-manglende områder. Teknikere farver kanin-kondyl-objektglas med Safranin O i 40 minutter, skyller i tre portioner destilleret vand og dipper prøverne i en alkoholisk løsning af fast grøn i 30 sekunder, efterfulgt af et hurtigt dip i eddikesyre. De skyller prøverne med vand og dehydroerer dem med ethanol-alcohol. Et stof kaldet xylen tilføjes før mikroskop-observation.