Microtox®-test: Bakteriel bioluminescens-assay til hurtig toksicitets-screening

Microtox®-testen er en standardiseret, hurtig (5–30 min) in vitro bioassay, der bruger den marine bakterie Vibrio fischeri (stamme NRRL B-11177) til at vurdere akut toksicitet.

Princip

• V. fischeri bioluminescerer naturligt (luciferase-reaktion).
• Giftstoffer hæmmer metabolisk aktivitet → lysudgang falder.
• % hæmning vs. kontrol = toksicitetsmål.
• EC50 (effektiv koncentration forårsagende 50% lys-tab) beregnes.

Protokol

1. Rekonstituer fryse-tørrede bakterier.
2. Eksponer til prøve-forduninger + forduningskontrol.
3. Inkubér ved 15°C (standard).
4. Avlæs luminometer ved 5, 15, 30 min.
5. Software beregner EC50, konfidensintervaller.

Anvendelser

• Vand/avløbsvand-udløb screening.
• Kemisk/produkt toksicitet-rangering.
• Sediment-porenvand, jord-løgvand.
• Drikkevand-forurening-begivenheder.
• Proces-kontrol (industriel).

Fordele

• Hurtig, lav omkostning, lille prøvevolumen.
• Bred følsomhed (organisk, anorganisk, tungt metaller).
• Standardiseret (ISO 11348, ASTM D5660).
• Bærbart instrument (Microtox® M500, FX).

Begrænsninger

• Bakterielt system ≠ pattedyr/menneske toksicitet.
• Identificerer ikke specifikt giftstof.
• Interferenser: farve, turbiditet, volatilitet, pH, salinitet (justeringer nødvendige).
• Ikke til kroniske/subletale endpoints.

Regulatorisk anvendelse

Screening-værktøj; ikke et selvstændigt regulatorisk endpoint. Komplementerer specifikke kemiske analyser og højere-tier bioassays (vandloppe, fisk).