Den TMRE Protokollen

tetramethylrhodaminisothiocyanat ethyl ( TMRE ) er en " langsom , lipofile, kationiske fluorescerende reditribution farvestof ", der anvendes i MitoPT ™ TMRE /TMRM mitokondriemembran Potential Assessment Kit , fremstillet af immunokemi Technologies, LLC. Processen hjælper til at se en transmembran elektrisk potentiale gradient i celler. Klargøring af Assay

Protokollen er enkel at følge , og det tager cirka 20 minutter at behandle ved 37 grader Celsius. De levende celler, der anvendes i assayet kan tage mellem adskillige timer og adskillige dage til at forberede til brug. De kontrol celler kan tage flere timer at forberede, da de har brug for at blive induceret til at undergå apoptose.
Protocol Del 1

Kultur celler til en densitet optimal for apoptose eller oxidativt stress induktion , i henhold til dine specifikke induktion protokol , men ikke at overstige 10 (6) celler /mL.
protokol Part 2

på samme tid , kultur en ikke -induceret negativ kontrol celle population (med samme tæthed som den inducerede befolkning.
protokol del 3

inducere apoptose eller vilje depolarisere mitokondrierne efter dit ønskede protokol .
protokol del 4

Forbered 1X Assay /vaskebuffer .
protokol Dele 5 til 8

Forbered 1 mM eller 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM lager. til protokol del 6, udarbejde en 1:100 fortynding af 1 mM eller 1:20 fortynding af 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM løsning til spiking i kultur prøver celle .

protokol del 7 , bejdse celler ved hjælp af en endelig 20-200 nM koncentration af MitoPT ™ TMRE /TMRM løsning .

protokol del 8 , analysere oplysninger.