TMRE-protokol: Vurdering af mitochondrial membranpotentiale

Om TMRE

Tetramethylrhodamine ethyl (TMRE) = "slow, lipophilic, cationic fluorescent redistributionsfarvestoffer" brugt i MitoPT® TMRE/TMRM Mitochondrial Membrane Potential Assessment Kit (ImmunoChemistry Technologies, LLC). Processen visualiserer transmembrant elektrisk potentialgradient i celler.

Protokoloversigt

Forberedelse af assay

Simpel protokol, ca. 20 min ved 37°C. Levende celler: flere timer til dage forberedelse. Kontrolceller: flere timer (skal induseres til at undergå apoptose).

Del 1: Cellopekstrering

Optimal tæthed for apoptose/oxidativ stress-induktion (ifølge specifikt protokol), max 10⁶ celler/mL.

Del 2: Negativ kontrol

Samidig opdrætning af ikke-induceret kontrolceller (samme tæthed).

Del 3: Induktion

Inducer apoptose eller depolariser mitochondrier efter ønsket protokol.

Del 4: Buffer

Forbered 1X Assay/Wash Buffer.

Del 5-8: Farvning & analyse

• Forbered 1 mM eller 0,2 mM MitoPT® TMRE/TMRM stock.
• Del 6: 1:100 forspænding af 1 mM, eller 1:20 af 0,2 mM til spiking i cellekultur.
• Del 7: Farv celler med endelig 20-200 nM koncentration.
• Del 8: Analyser data.