TPA oprensningsprotokoller

Vævsplasminogenaktivator eller TPA er en type af serinprotease , som er protein i stand til at ødelægge blodpropper. TPA er fundet i de celler, der internt dækker blodkarrene. TPA protokoller er en del af den farmaceutiske og medicinsk forskning på slagtilfælde, samt hjerte-og lungesygdomme , såsom pulmonal emboli og myokardieinfarkt . TPA oprensning henviser til isolering af dette protein fra andre molekyler gennem en række processer , herunder chromatografi og elektroforese. Oprensning af TPA fra Hog Nyre

Denne protokol bruges i studier af fibrinolyse , færd med at bryde et produkt af koagulation kaldet fibrin, relateret til dannelsen af ​​tumorer. Teknikere ekstrakt TPA fra acetone - tørret gris nyre med kaliumacetat buffer, ved pH 4,2 . Derefter kan de tilføje ammoniumsulfat at fremkalde celle udfældning . De tilføjer n-butyl - sepharose til prøverne , som derefter analyseret på et chromatographer . Concanavalin A er også tilføjet og chromatograph.y at adskille forskellige proteiner udføres.
Oprensning af TPA fra kinesiske hamstere og E. coli celler

Proteinrenhed er en vigtig faktor for succes i biologiske eksperimenter . Renset TPA er også kommercielt tilgængelige , og dermed spare tid og undgå risikoen for at skade forsøget på grund af dårligt renset løsning . Denne protokol indebærer rensningsprocesser af TPA i pattedyr og bakterieceller. Teknikere udfældes celleprøver filtrerer dem og udføre affinitet og gelchromatografi analyse. Senere, de analyserer og sammenligne resultaterne , før kommerciel produktion.
Angivelse af aktiv human TPA i E. coli

Klarede cellelysater tilsættes en lysin - Sepharose , analyseret i en chromatographer og vasket med en opløsning af natrium- chlor. En anden prøve anbringes på en anden chromatografisøjle indeholdende proteiner, der binder til TPA med en meget høj affinitet. En prøve fra den anden kolonne er blandet med en opløsning af zink - sepharose . Det resulterende protein viser mere end 90 procent renhed , ifølge tidsskriftet " Applied and Environmental Microbiology . "