QuikChange Mutagenesis protokoller

QuikChange mutagenese er navnet på et kit anvendes i bioteknologisk forskning for at fremkalde genetisk mutation eller DNA- ændring. Agilent Technologies er firmaet bag produktet , som er tilgængelig i to versioner, QuikChange II og QuikChange Lightning . Begge sæt indeholder en pufferopløsning , enzymet DNA-polymerase , farve reagenser , DNA-sekvenser eller primere , og celleprøver . Mutant Strand Synthesis Reaction Protocol

Teknikere syntetisere to oligonukleotider eller korte DNA-sekvenser , der indeholder den ønskede mutation. Så forberede kontrol reaktion med DNA-sekvenser , dNTP-blanding -opløsning og DNA-polymerase -enzym , tilsætning af destilleret vand. Senere de forbereder en række eksempler reaktioner under anvendelse af forskellige koncentrationer af dobbeltstrenget DNA ( dsDNA ) , samtidig med primer eller oligonukleotider koncentration konstant, i henhold til producentens anvisninger. De holder prøverne ved 203 grader F i 30 sekunder. Prøven indeholder DNA -segment nummer to er også testet under temperatur cykling, en teknik, hvor temperaturændringer i korte perioder af gange. Endelig prøverne anbragt på is i to minutter.
Dpnl fordøjelse af Amplifikationsprodukterne protokollen

enzym Dpnl begrænsning skærer DNA på specifikke steder . En mikro- liter af dette enzym tilsættes direkte til hver enkelt amplificeringsreaktion under sin standard mineralolie overlay ved hjælp af en mikro- pipette eller specialiserede aerosol -resistente pipettespids . Imidlertid er en mineralolie overlay kun nødvendig, hvis termiske cykler , et apparat anvendt til at amplificere DNA-segmenter , ikke har en varm -top forsamling. Reaktionen er forsigtigt blandet og senere sat i en mikrocentrifuge i et minut. Efter at prøverne inkuberes ved 98,6 grader F i en time.
Transformation af XL1 -Blue Supercompetent Cells Protokol

XL1 - Blue er en tetracyklin -resistente cellelinie, der kommer med de QuikChange Mutagenesefremgangsmåder kits. I løbet af denne protokol , teknikere tø de celler, der tidligere blev opbevaret ved -112 grader F, på is. Derefter tilsættes en mikro- liter af Dpnl DNA behandlet , opvarme det til 107,6 grader F i 45 sekunder , og reaktionen på is i to minutter placere . Efter denne procedure , teknikere tilføje et præparat af NZY ( caseinhydrolysat og gærekstrakt ) forvarmet til 107,6 grader F og inkuberes i en time. Præparatet er derefter sat på agar-gel -plader og inkuberes ved 98,6 grader F i 16 timer.
Hoteltilbud