Molisch-prøve: Princip, procedure og tolkning til karbohydrat-detektion

Molisch-prøven er en sensitiv, generel kvalitativ prøve for karbohydrater (mono-, di-, polysaccharider, glykoproteiner).

Kemisk princip

1. Dehydrering: Konc. H₂SO₄ fjerner H₂O fra karbohydrat → furfural (pentoser) eller 5-hydroxymethylfurfural (hexoser).
2. Kondensation: Furfural-derivater reagerer med α-naftol (1% i ethanol) → lilla/fiolet cyklisk produkt (Molisch-kromogen) ved væskegrænsefladen.

Procedure

1. 2 ml prøveløsning (eller suspension) i et rent prøverør.
2. Tilsæt 2–3 dråber α-naftol-løsning; bland blidt.
3. Hæld røret; hæld langsomt 1–2 ml konc. H₂SO₄ langs siden for at danne et distinkt nederste lag. Bland ikke.
4. Observer grænsefladen med det samme.

Tolkning

• Positiv: Lilla/fiolet ring ved overgangen inden for sekunder. Intensitet ∝ karbohydrat-koncentration.
• Negativ: Ingen farveændring (eller kun gul/brun fra karamellisering).

Sensitivitet og begrænsninger

• Detekterer ~1–5 µg karbohydrat.
• Falske positiver: Nogle ikke-karbohydrater (glycerol, mælkesyre, visse aminosyrer) giver svag farve.
• Adskiller ikke karbohydrat-type; fulgt af specifikke prøver (Benedict's, Barfoed's, Seliwanoff's, Bial's, jod).
• Konc. H₂SO₄-fare: ætsende, eksotermisk; bær PSA, tilfør syre til rør (ikke vand til syre).

Anvendelser

Screening for karbohydrater i ukendte prøver, fødevareanalyse, biokemiske fraktioner, plantextrakter.