pcDNA3.1 plasmid kort: Vigtige elementer til mammal ekspression

pcDNA3.1 plasmid familien (Invitrogen/Thermo Fisher) er en bredt brugt mammal ekspressionsvektor. Vigtige elementer inkluderer:

Kernefunktioner

• CMV promoter: Stærk konstitutiv promoter for højniveau udtryk i mammal celler (ikke T7 – T7 er til in vitro transkription).
• Multiple cloning site (MCS): Omsluttet af restriktionssteder til retningsbestemt kloning.
• BGH polyadenyleringssignal: Bovin væksthormon polyA til mRNA stabilitet og kerneeksport.
• SV40 oprindelse: Til episomal replikation i celler, der udtrykker SV40 stor T-antigen (fx HEK293T).
• f1 oprindelse: Enkelstrenget DNA produktion til sekvensering/mutagenese.
• Neomycin/kanamycin resistens (Neo^R/Kan^R): G418 selektion i mammal celler; kanamycin til bakteriel selektion.
• Ampicillin resistens (Amp^R): Bakteriel selektion (β-laktamase).
• ColE1 oprindelse: Højkopi replikation i E. coli.
• T7 promoter: Opstrøms MCS til in vitro transkription (IVT) applikationer.

Versionsforskelle

• pcDNA3.1(+): CMV → MCS → BGH polyA i fremad retning.
• pcDNA3.1(-): Omvendt orientering (nyttejlig til visse kloningstrategier).
• pcDNA3.1/V5-His, /myc-His, /HA: Inkluderer epitop-tags og His₆ til detektion/renovering.
• pcDNA3.1/CT-GFP, /NT-GFP: GFP fusionsvarianter.

Applikationer

Transient/stabil transfiktion, stabil cellelinje generering, proteinekspression, funktionsstudier, antistofproduktion. Højt kopital i E. coli lette plasmid præparation.

Note: Den oprindelige beskrivelse fejlagtigt nævnte T7 som mammal promoter. CMV er mammal promoter; T7 er til IVT.