Perfusionsteknik: Principper, anvendelser og procedure

Perfusionsteknikken

Giver hurtig, ensartet fixation af alle celler i vævet via det vaskulære system (4 % paraformaldehyd). Bruges til at identificere målorgan for medicin og forstå hjernens struktur/funktion.

Udstyr (Things You'll Need)

• Forsøgsdyr (rotte/abe)
• Perfusionspumpe, bægerglas
• Fixativ (4 % paraformaldehyd)
• Sprøjtespids
• Perfusionsdråbesæt
• Saks, skalpel, pinset
• 0,9 % saline
• Iskasse

Procedure (trin-for-trin)

1. Fixativ: 40 g paraformaldehyd i 800 ml vand. Opvarm til 60°C under røring. Køl til 4°C. Justér pH til 9,5 (pH-meter, glacial eddikesyre).
2. Pumpeopsætning: Monter glasdele/nål. Skyl 100 ml vand gennem for at fjerne rester. Stil fixativ-bæger i is.
3. Prime system: Åbn rør i fixativ. Justér volumen til dyrets størrelse. Lå ventilen. Fyld apparat med 0,9 % saline.
4. Kirurgi forberedelse: Instrumenter klar. Anæstesi (ketamin 0,5 mg/kg). Dyr på ryge.
5. Eksponering af hjerte: Skær langs midriffen. Blunt saks skærer bindevæv nederst. Eksponér hjerte. Hold med pinset; indsæt nåle i venstre hjertekammer.
6. Perfusion: Åb ventil for saline. Kontroller flow og at dyret lever (hjerte slår). Når blod erstattes af saline: skift til 4 % paraformaldehyd.
7. Stop og dissektion: Stop perfusion. Disseker væv af interesse. Opbevar i samme medium ved 4°C.