Hvad Er ELISA Detection?
Et enzymbundet immunsorbentassay (ELISA) er en test udfrt i en immunologi laboratorium til bestemmelse af niveauer af protein i en biologisk prve. ELISA-detektion refererer til det sidste trin af testen, ved hvilken en klar oplsning, eller substrat, sttes til en plastplade indeholdende bundet enzym-mrket antistof. Enzymet spalter substratet, og der sker en farveforandring. Lysabsorbans af den endelige farvede oplsning mles derefter p en ELISA-pladelser eller spektrofotometer. Der findes forskellige typer af ELISA-test med de to mest almindelige er den indirekte ELISA og indfangning, eller sandwich, ELISA. Den indirekte ELISA anvendes til at detektere et protein, kaldes et antistof, i en patient s serum. Et eksempel p en indirekte ELISA-test er det humane immundefektvirus (HIV) test, der anvendes til pvisning af antistoffer mod HIV. Sandwich ELISA test detekterer et protein eller antigen, ved at fange det mellem to antistoffer. Pvisning af hormonet humant choriongonadotropin (hCG), der er forhjet under graviditet, udfres med en sandwich-ELISA test. Begge prver har en ELISA-detektion trin ved afslutningen af assayet. Dette trin involverer tilstning af et antistof, som har et enzym molekyle bundet til den. Efter tilstningen af den enzymmrkede antistof, en farvels oplsning, indeholdende substratmolekylet er specifikt for dette enzym, tilsttes. Enzymet spalter substratmolekylet og oplsningen skifter farve afhngig af den anvendte kombination. Bestemmelse af mngden af antistof eller antigen i patientprven gres ved at mle intensiteten af farveskiftet. Der er flere enzymer substratkombinationer er tilgngelige til anvendelse i ELISA detektionstrin. Den mest almindelige enzym er peberrodsperoxidase (HRP), som kan spalte de substratmolekyler ortho-phenylendiamin-dihydrochlorid (OPD) og tetramethylbenzidin (TMB), blandt andre. Spaltning af bde OPD og TMB resulterer i en gul farve, og den optiske densitet eller absorbans af lys af disse substrater mles ved en ELISA-pladeaflser. Den lysabsorbans OPD mles ved en blgelngde p 490 nanometer (nm), mens TMB mles ved 450 nm. anden almindelig enzym anvendt i ELISA-detektion trin er alkalisk phosphatase. Dette enzym anvendes med substratet p-nitrophenylphosphat (PNPP), og producerer ogs en gul oplsning. PNPP absorberer lys ved en blgelngde p 405 nm. Udvlgelse af de enzym-substratkombinationer er normalt baseret p det enzym-mrkede antistoffer er kommercielt tilgngelige, og hvilket udstyr vil blive brugt til at mle lys absorbans. De mange kombinationer tilgngelige for ELISA-detektion gr ELISA-testen meget alsidige. Det er et vigtigt redskab i sygdom test og forskningslaboratorier.Relaterede Sundhed Artikler