Vævskultur: Teknikker, Anvendelser & Celler

Hvad er vævskultur?

Vævskultur er fremme af celler i en væske-baseret vækstmedium i laboratoriet til forskellige videnskabelige formål. F.eks. bruges vævskulturer til diagnostik af genetiske sygdomme, som medium for intracellulære patogener som bakterier eller virus, eller i undersøgelser af cellerne selv.

Vævskultur-celler

Nogle celler hæfter sig til bunden af petriskåle, mens andre forbliver suspension i væsken. Celler kan være af plante- eller dyreoprindelse. Celler i vævskulturer kan være primære celler (høstet direkte fra en organisme) eller fra en cellelinje, der er vedligeholdt i kultur. Cellelinjer er ofte cancerceller, hvilket skal overvejes ved planlægning og tolkning af eksperimenter.

Behandl celler med omhu

Hæftende celler fjernes fra petriskålen ved skrabning eller med en protease (typisk trypsin og EDTA). Skrabning dræber mange celler og bør kun bruges ved fremstilling af cellelysater eller når trypsin/EDTA absolut skal undgås.

Trypsinisering fjerner ikke kun proteiner, der får celler til at hæfte, men også de fleste andre proteiner på cellemembranen. Cellene klumper sig sammen og bruger noget tid (typisk over natten) på at genoprette hæftningen. Ved at tilføje en minimal mængde trypsin (ca. 1 ml til en 25 cm² flaske), ryste flasken i maksimalt 5 sekunder for at dække monolayeret, og derefter aflade eller aspirere overskydende trypsin, reduceres cellernes eksponering. Lad cellerne hvile i inkubatoren under trypsinisering.

Når cellerne løsner fra bunden, tilføjes medie med serum, og lysaten aspireres op og ned i pipetten forsigtigt. Lad lidt medie blive i skålen, mens du pipetter op og ned flere gange for at bryde klynger og opnå en jævn suspension.

Undgå at suge bobler op i pipetten. Rør eller vortex ikke heftigt; cellerne er meget fragile i denne klumpede tilstand.

At varme-inaktivere eller ej?

I vævskulturs tidlige dage kendte man, at fosterbovint serum (FBS) indeholdt komplementproteiner, der lyser celler. Komplementproteiner er uønskede i celkultur. Varme-inaktivering af FBS ved 56 °C i 30 minutter gør dem inaktive. Forvarmning af FBS til 37 °C er også tilstrækkeligt.

Tidligere dræbte varme-inaktivering også mycoplasma og andre forureninger. I dag filtreres FBS og medier gennem 0,1 µm eller endda 0,04 µm filtre, så ingen mycoplasma kan slippe igennem. Det rejner spørgsmålet: skal man varme-inaktivere?

Varme-inaktivering nedbryder alle FBS-komponenter – vitaminer, aminosyrer og vækstfaktorer – muligvis under grænsen for nogle kræsne cellelinjer.

Hvis du arbejder med en langsomt voksende eller kræsen cellelinje, overvej kun at filtrere dit FBS. Det kan øge cellernes robusthed.