Ellman Assay: Protokol til Detektion af Organofosfat-Pesticid Eksponering

Ellman Assay – Hurtig og Følsom Detektion af Pesticid-Eksponering

Ellman assay gør det muligt at overvåge hæmning af blodcholinesterase, et enzym, der nedbryder acetylcholin (en vigtig signalstof). Hæmning af dette enzym indikerer eksponering for organofosfat-pesticider. Metoden er hurtig, kræver kun en enkelt bloddråbe, og har ikke behov for stor centrifuge – kun et instrument, der kan måle lysabsorption ved 405 nm.

Fordele ved Ellman Assay

• Minimalt prøvemateriale: Kun en dråbe blod nødvendig.
• Simpelt udstyr: Ingen centrifuge kræves – kun spektrofotometer/absorptionsmåler.
• Hurtigt resultat: Kan kombineres med urin-metabolitanalyse for bekræftelse.
• Kostnadseffektiv: Egnet til store screening-programmer.

Metode – Oversigt

1. Forberedelse af mikroplade

   Brun brøndene i en mikroplade med reagensblanding indeholdende acetylthiocholin (AChE).

2. Tilføjelse af blodprøve

   En mikro-mængde blod fra hver person tilføres hver brønd.

3. Detektion

   Tilføj reagens, der binder til proteinet af interesse. Før måling tilføjes kromogen reagens, der udsender lys ved 405 nm. Instrumentet måler lysabsorptionen ved denne bølgelængde.

Vigtige Forholdsregler

• Kromogent reagens skal holdes koldt: Ved højere temperaturer ændres bølgelængden af det udsendte lys, hvilket forfalsker resultater. Opbevar i køleskab.
• Brug friske reagenser og kalibreret udstyr.
• Inkluder kontroller (positive/negative) ved hver kørsel.

Anvendelse

Bruges i arbejdsmiljømedicin, landbrugsmedicin og forensik til at dokumentere eksponering for organofosfater (f.eks. malathion, parathion, klorpyrifos).