Retrovirusinfektion protokoller

Med indhold af en RNA-genom , der er indkapslet i en kapsid og lipid konvolut , retrovirus indeholder polypeptidkæder , der hjælper forbinde dem til receptorer i membraner af værtsceller de inficerer . Mens de fleste celler ' arvelig information er kodet i DNA, der af retrovirus , der er indeholdt i RNA ; retrovirus også bære enzymet reverse transkriptase , der giver dem mulighed for at holde sig til værts -DNA. Visse protokoller følges af laboratorier i målrettet infektion af DNA celle med disse vira . Forberedelse Laboratoriet

Visse laboratorieudstyr og leverancer er nødvendige for at hjælpe i processen med retroviral infektion . Udstyr omfatter 1 pipette bistand , 1 pipette - mand, 1 vævskultur hætte , 37 -graders Celsius og 32 grader Celsius væksthuse , og en Eppendorf centrifuge. Leverancer omfatter vævskulturplader , en engangs Pasteur-pipette , kvalificeret retroviral supernatant , filtersteriliseret polybren og filtersteriliseret protaminsulfat .
Klargøring af Cell til infektion

Prior infektion skal målceller opdeles i en vævskultur- plade og inkuberet natten over i et 37 graders Celsius inkubator med fem procent CO2. Formålet inkubationstiden er at skabe celler, der er 50% sammenflydende . Forberedelse af celler på forhånd er nødvendigt at sikre , at cellerne er optimeret for infektionen processen. Nolan Lab på Stanford University anbefaler, at celle -infektion begynder altid starte med at inficere NIH 3T3-celler til at hjælpe med at optimere resultaterne af testen.
Infektion af cellerne

Efter inkubationstiden er overstået, bør forskerne sikre, at cellerne er både sundt og retten sammenløb . Brug af cellekultur hætte er cellemateriale aspireret, og en viral supernatant anvendes til cellerne. Når der anvendes, bør pladen være forsigtigt rystet frem og tilbage for at sikre, at det er jævnt fordelt . Cellerne bør derefter centrifugeres inokuleret ved at placere dem i Eppendorf-centrifuge og spinning dem ved 2500 rpm i 90 minutter ved en temperatur på 30 grader Celsius. Bagefter bør cellerne inkuberes ved 32 ° C i en til to dage . Den virus erstattes derefter med de udtrukne celler og anbringes i kuvøsen skal analyseres alt fra tre til syv dage efter den oprindelige infektion.
Hoteltilbud