Chloramphenicol Plate Preparation

Chloramphenicol er et bredspektret antibiotikum , der dræber bakterier mikrober ved at interferere med deres evne til at replikere . Dette antibiotikum blev oprindeligt udviklet til at bekæmpe infektioner hos mennesker , men ifølge Drug.com , det er kun brugt nu, som i denne publikation , som en sidste udvej, når andre lægemidler ikke virker på grund af alvorlige bivirkninger såsom aplastisk anæmi, hypoplastic anæmi , trombocytopeni og granulocytopeni . Chloramphenicol er nyttig i et forskningslaboratorium for molekylærbiologiske eksperimenter. Når chloramphenicol er forberedt på en plade , kan det anvendes til at påvise bakteriel koncentration eller at isolere specifikke bakteriestammer for yderligere eksperimenter . Ting du skal
Destilleret vand
Chloramphenicol
1,0 procent tryptone
0,5 procent gærekstrakt
1,0 procent natriumklorid (NaCl) pH 7,0
95 procent ethanol
Agar
2 -liters kolbe
Magnetic omrøring plade
mellemstore magnetisk omrørerlegeme
latex eller nitril-handsker
Laboratory skala
Autoklave
30 sterile 10 cm plader
blå markering pen
Parafilm
Aluminiumsfolie
Autoklave tape myHotelVideo.com: Vis Flere Instruktioner
1

sat på et par af latex eller nitril -handsker til at forberede LB bouillon. LB-bouillon er en almindelig forkortelse for lysogeni bouillon eller Luria -bouillon , og det er som anvendt som vækstmedier til dyrkning af bakterier. Det kan gøres fra bunden i laboratoriet , eller for at spare tid, det kan købes fra enhver molekylær biologi stock leverandør.
2

Placer et ark vejepapir på skalaen. Tryk nulstilling knappen på skalaen , så vægten af papiret ikke er inkluderet i den endelige vægt. Tilføj små mængder trypton ad gangen, indtil den du når 10 g . Fold derefter den vejer papir på midten med trypton i midten. Saml indvejningen papir og omhyggeligt bruge foldet papir som en tragt for at tilføje trypton til 2 L kolbe. Følg denne fremgangsmåde for at veje 5 g gærekstrakt , 10 g NaCl, og 15 g agar.
3

Drop omrørerstang til kolben og centrere kolben på magnetomrører . Tilføj nok destilleret vand for at bringe opløsningen op til 1 liter .
4

Drej opsigt plade på , og se omrørerstang . Pladen bør fastsættes på den rigtige hastighed for at tillade rørepind til at bevæge sig i et moderat tempo uden at blive stukket på siderne af kolben. Juster indstillingerne efter behov. Lad opløsningen sidde på pladen , indtil alle reagenser er opløst .
5

Sluk omrøringsplade , og strække en 3-tommer firkantet stykke parafilm over toppen af kolben, til dække og beskytte kolben fra forureninger eller spildes . Derefter dække parafilm med et stykke aluminiumsfolie og tilføje et stykke mærkning autoklave tape på toppen af ​​folien.
6

Placer opløsning i en autoklav på flydende cyklus i 20 minutter ved 15 psi til sterilisere den .
7.

kolben Fjern fra autoklaven. Det vil være meget varmt. Lad opløsningen køle til omkring 55 grader celsius , ved at lade det sidde ved stuetemperatur , eller ved at placere kolben i en 65- grader celsius vandbad .
8

Spray og tør ned arbejde overflade med 95 procent ethanol for at forhindre forurening . Det er også en god ide at ændre dine handsker inden håndtering af pladerne .
9.

Mark siden og låg af hver plade med lodret blå bånd ved hjælp af markeringspen . Dette indikerer pladerne indeholder LB bouillon og chloramphenicol.
10

Tilføj nok chloramphenicol antibiotikum til løsningen , så koncentrationen når den ønskede mængde , afhængig af de bakterier, du skal arbejde med . En fælles slutkoncentration er 100ug/ml . Til denne koncentration , tilsæt 1 ml chloramphenicol lager (ved 25mg/ml ) . Swirl kolben i en cirkulær bevægelse , eller placere den tilbage på magneten omrøringsplade i 1 til 2 minutter for at sikre, at det er godt blandet.
11

Tør mund kolben ned med ethanol, og derefter hælde opløsningen i pladerne , indtil de er fyldt halvt op med løsningen. Lad pladerne hærde , dækker hver tallerken med et låg , og opbevar dem på hovedet ved 4 grader celsius for at forhindre dem i at tørre ud .
Hoteltilbud