Visualisering af bakteriofager: Mikroskopi og visningsteknikker

Bakteriofager (fager) er 20–200 nm – under lysmikroskopi-opløsning. Visualisering kræver:

1. Elektronmikroskopi (EM)

• Transmission EM (TEM): Intern struktur, kapsid-symmetri, hale-morfologi. Guldstandard.
• Scanning EM (SEM): 3D overflade-topologi.
• Kryo-EM: Næsten-atomær opløsning uden farvning; Nobel 2017.

2. Lysmikroskopi-forbedringer

• Fluorescens: Fase mærket med fluorescerende farvestoffer/proteiner (fx GFP-fusioneret kapsid). Live-billeddiagnostik mulig.
• Mørke-felt / Fase-kontrast: Forbedrer kontrast for umærkede partikler; begrænset opløsning.

3. Fase-display

• Peptid/protein-bibliotek fusioneret til kapsid-protein (pIII/pVIII) → fenotype-genotype link.
• Anvendes til: Epitope-kortlægning, ligand-opdagelse, antistof-udvikling, rettet evolution.

4. Negativ farvning (TEM-forberedelse)

• Uranylacetat / fosfotungstinsyre → tungt metal omgiver fase → høj kontrast.
• Hurtig, rutine for morfologi-check.

Metode-valg afhænger af spørgsmål: struktur (kryo-EM), dynamik (fluorescens), binding (fase-display).