Biotinylering protokoller

Biotinylering er processen sammenkædning biotin eller vitamin H , til et protein eller andre molekyler. Denne videnskabelige fremgangsmåde bruges oftest i bioteknologi og molekylærbiologi forskning med DNA , proteiner og antigener , der er molekyler kroppens immunsystem genkende som angribere. Biotinylering protokoller omfatter biotinylering af antistoffer og peptider , såvel som celleoverflade biotinylering . Biotinylering af antistoffer

For at linke biotin til antistoffer proteiner producere når et antigen kommer ind i kroppen , teknikere bruger natriumbicarbonat ( NaHC03 ) ved pH 9, dimethylsulfoxid (DMSO ),

NHS -biotin og en saltopløsning stof kaldet PBS. Prøver blandes med natriumbicarbonat, der senere føjes til NHS -biotin i DMSO . Opløsningen tilsættes derefter til de analyserede antistoffer og inkuberet på et stykke udstyr kaldet en rotator i fire timer ved stuetemperatur eller natten over ved 39,2 grader Fahrenheit. Endelig er fortyndet med PBS.
Cell Surface Biotinylering

celleoverfladen biotinyleringen protokol , teknikere bruger vævskultur , phosphatpufret saltopløsning (PBS ) ved pH 7,4 og sulfosuccinimidyl -2-( biotinamido ) ethyl -1 ,3- dithiopropionat buffer løsning til at skabe balance mellem syreindhold indeholder aminogrupper og TrisCI , i henhold til gældende protokoller Protein Science.The cellerne blandes med biotin og bufferopløsning , dekanteret og centrifugeret . Solid indhold og specifikke proteiner senere analyseret på et gelelektroforese plade .
Biotinylering af peptider

For at udføre biotinylation af peptider , det anvendte reagens er NHS -SS biotin , ifølge Philip Shepherd i " monoklonale antistoffer : . A Practical Approach " Peptider er korte fragmenter af aminosyrer, de molekyler, der danner proteiner og DNA . I denne protokol, er den kommercielle løsning NHS -SS Biotin opløst i vand. Så peptid prøve føjes til det, sammen med natriumbicarbonat at afbalancere surhedsgrad eller pH. Opløsningen inkuberes derefter på is i to timer. Teknikere kan observere prøven med eller uden biotinmolekyler .
Hoteltilbud