Biotinylering: Protokoller & anvendelser i bioteknologi

Hvad er biotinylering?

Processen med at knytte biotin (vitamin H) til et protein eller andre molekyler. Brugt i bioteknologi og molekylær biologiforskning (DNA, proteiner, antigener). Protokoller inkluderer: biotinylering af antistoffer/peptider, celleoverflade-biotinylering.

Biotinylering af antistoffer

Reagenser: natriumbikarbonat (NaHCO₃) pH 9; DMSO; NHS-Biotin; PBS (saline). Fremgangsmåde: bland med natriumbikarbonat, tilføj NHS-Biotin i DMSO, tilføj til antistoffer, inkuber på rotator 4 timer ved stuetemperatur eller over nat ved 4°C (39,2°F). Til sidst: forspænd med PBS.

Celleoverflade-biotinylering

Reagenser: vævskultur, PBS pH 7,4, sulfosuccinimidyl-2-(biotinamido)ethyl-1,3-dithiopropionat buffer (amino-grupper), TrisCl (ifølge Current Protocols in Protein Science). Celler blandes med biotin/buffer, afdekanteres, centrifugeres. Faste indhold og specifikke proteiner analyseres på gel elektroforese.

Biotinylering af peptider

Reagens: NHS-SS Biotin (ifølge Philip Shepherd). Peptider = korte aminoksyrasekvenser (protein/DNA byggeklodser). NHS-SS Biotin opløses i vand, peptidprøve + natriumbikarbonat (pH-balance) tilføjes. Inkubation på is i 2 timer. Prøve kan observeres med/uden biotin-molekyler.