Blodplasma-separation: Sammenligning af centrifugations- og filtreringsteknikker

At adskille plasma – den acellulære væskekomponent af blod – fra cellulære elementer som røde blodlegemer, hvide blodlegemer og blodplader er et grundlæggende trin i klinisk kemi, koagulationstest og biobanking. To hovedsagelige fysiske metoder dominerer denne proces: centrifugation og filtrering.

1. Centrifugation: Referencestandarden

Princip

Centrifugation udnytter sedimentering under centrifugaalkraft (udtrykt som relativ centrifugaalkraft, RCF, eller g-kraft). Ifølge Stokes' lov bevæger tætnere partikler sig udad hurtigere, der danner distinkte lag baseret på tæthed.

Standardprotokol

1. Indsamlet helt blod i et passende antikoagulant-rør (citrat til koagulationsstudier, EDTA eller heparin til klinisk kemi).
2. Balancer rør nøje i rotoren.
3. Centrifuger ved typiske indstillinger: 1.500–3.000 ×g i 10–15 minutter ved 20–25 °C. Højere g-krafter eller længere varigheder giver blodplade-fattigt plasma.
4. Tre lag opstår: røde blodlegemer (bund), en tynd buffy coat (hvide celler og blodplader), og plasma (top, ~55 % af volumen).
5. Aspirér plasma med en pipette, med omhu for at undgå buffy coat.

Kritiske variable

• RCF, ikke RPM: RCF = 1,118 × 10⁻⁵ × r (cm) × RPM². Standardiser protokoller efter RCF.
• Temperatur: 20–25 °C til rutinearbejde; 4 °C til labile analitter (f.eks. laktat, ammoniak).
• Tid: Utilstrækkelig centrifugation efterlader blodplade-forurening, der forårsager pseudohyperkaliæmi og falskt lavde blodplade-tællinger.
• Dobbelt-spin protokol er essentielt for blodplade-frit plasma, især til koagulationsfaktor-analyser.

2. Filtrering: Plasma-separations-rør og membran-enheder

Princip

Filtrering bygger på størrelses-eksklusion: et porøst membran (pore-størrelse ~0,2–0,5 µm) tillader plasma at passere, mens cellulære komponenter holdes tilbage.

Typer

• Integrerede rør (f.eks. BD PST™, Lithium Heparin PST): Kombinerer en gel-barriere med et polyester-filter. Under centrifugation dannes gel-barrieren, og filteret adskiller plasma, eliminerende manuel pipettering.
• Udskillede filtre (f.eks. Pall, Whatman): Virker ved tyngdekraft eller vakuum. Nyttige til små volumener, point-of-care-test, eller når en centrifuge er utilgængelig.

Fordele

• Hurtigere arbejdsgang uden manuelt adskillelses-trin.
• Reduceret hæmolyserisiko, fordi pipettering undgås.
• Lukket system forbedrer biologisk sikkerhed.

Begrænsninger

• Protein-adsorption til membranet kan sænke målte koncentrationer af albumin, immunglobuliner og andre proteiner.
• Blodplade-aktivering og frigivelse under filtrering kan ændre koagulationsfaktorer, serotoning og tromboksan-niveauer.
• Uegnet til blodplade-funktionstest, visse koagulationsanalyser, og situationer, der kræver absolut protein-nøjagtighed.
• Volumen-begrænset (typisk 1–5 mL).

Sammenligning og valg-guide

Parameter	Centrifugation	Filtrering (PST)
Plasma-renhed	Høj (operatør-afhængig)	Konsistent, men med protein-tab
Blodplade-forurening	Kontrollerbar via dobbelt-spin	Lav (filter retainer blodplader)
Analyt-egnethed	Alle tester	Rutine-kemi; undgå koagulation, protein, og blodplade-assays
Gennemstrømning	Høj (rotor-kapacitet)	Per-rør basis
Udstyr	Centrifuge kræves	Centrifuge (til PST) eller vakuum/tyngde
Omkostning per prøve	Lavere	Højere (specialiserede rør)

Kvalitets-essentials

• Fyld rør til angivet volumen; antikoagulant-til-blod-forholdet er kritisk.
• Bland blødt ved at vende 8–10 gange straks efter indsamling.
• Behandl inden for retningslinje-tidsrammer (f.eks. citrat-rør <4 timer; EDTA-rør <24 timer ved stuetemperatur).
• Mærk tydeligt: plasma (antikoaguleret) vs. serum (koaguleret, intet antikoagulant).

Centrifugation forbliver referencemetoden for højeste analytisk trofasthed. Filtreringsrør tilbyder bekvemmelighed til højtvolumen rutine-kemi – valider mod centrifugation for hver analyse før adoption.