Adhærente celler protokol

Celler i kultur er enten en form dyrkes i suspension , såsom blodlegemer eller celler, såsom fibroblaster , der kræver en overflade, som de kan tilslutte sig. Nogle af de overflader kan kræve belægning i forskellige ekstracellulære matricer efter celletype og studier. Alle cellekulturer kræver , der skal udføres , er aseptiske forhold. Optimal miljø

fleste celletyper kan dyrkes i Dulbeccos modificerede Eagles medium ( DMEM) eller Roswell Park Memorial Institute (RPMI ) med tilsætning af 10 procent føtalt kalveserum , 2 milimoles af aminosyre glutamin og antibiotika , for eksempel, 100 enheder penicillin og 0,1 milligram per milliliter streptomycin. Cellerne holdes i deres medier i en fugtig inkubator ved 37 grader Celsius og 5 procent kuldioxid.
Opdeling

skal kontrolleres dagligt Celler for infektion , død eller vækst . Når vævsdyrkningskolben 80 procent belagt i celler , skal cellerne deles for at opretholde cellernes sundhed og log-fase af vækst. Medier fjernes, og cellerne vaskes i phosphatpufret saltvand. Adhærente celler kræver tilsætning af trypsin og ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA ) for at fjerne celleadhæsion -proteiner. Gentle agitation bør fjerne cellerne. Medier skal tilføjes for at neutralisere trypsin /EDTA-opløsning .

Ompodning

fortyndede celler og tryspin /EDTA-opløsning kan centrifugeres til pellet og vask cellerne . Cellerne kan resuspenderes i medier og fortyndet og udpladet i nye kolber. Hver gang cellerne opdele celler passage nummer øges med én.
Media Change

Medier bør ændres to gange om ugen ved at fjerne de gamle medier og erstatte med ny , opvarmes medier .
hoteltilbud