MBP oprensningsprotokoller

MBP eller maltosebindingsprotein findes i bakterier Escherichia coli, som er en del af tarmfloraen i mennesker og dyr. Oprensningen af MBP omfatter en række procedurer, der sigter på at adskille proteinets bestanddele . I molekylærbiologi MBP rensning er en vigtig fremgangsmåde til undersøgelse af struktur og funktion af dette protein . MBP oprensningsprotokoller omfatter MBP fusionerede proteiner rensning, små MBP - fusion og maltosebindingsprotein fusion tag rensning. MBP fusionsproteiner Oprensning

I denne protokol teknikere vaske 20 ml af polymeren amyloseharpiks med Atris opløsning ved pH 7,4 , natriumchlorid, mercaptoethanol (ME) og ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA ) i henhold til protokollerne Online . Celleprøver tilsættes , centrifugeret og analyseret på gelelektroforese. Prøver analyseres også i en chromatographer , hvor teknikere eluat, eller observere løsningens vælgere , mens den passerer gennem kromatografisøjlen.
Small Scale MBP - fusion Proteinoprensning

Ifølge Hebrew University of Jerusalem, biologer bruger reagenset isopropyl BD- 1- thiogalactopyranosid (IPTG ) , spin- cellekultur i 10 minutter ved 8.000 omdrejninger i minuttet på 39,2 grader Fahrenheit. Senere , de fjerner ovenstående væske og bland kold PBS-buffer til prøven , som er opdelt i flere rør og centrifugeres igen. Prøverne holdes på -112 grader Fahrenheit for posterior analyse.
Maltosebindingsprotein Fusion Tag Purification

Affinitetsmærker gensplejses molekyler ansat i molekylærbiologi til påvisning og oprense proteiner. Denne protokol er et komplekst sæt af procedurer, der er opdelt i tre faser , som omfatter opførelse af polyhistidine protein markør ( HisMBP ) ; et pilotforsøg for at vurdere opløseligheden af ​​proteinet; og i stor skala oprensning af MBP -molekyler ifølge Nature protokoller. Bortset fra E.coli prøver teknikere bruger ampicillin, kanamycin, IPTG anhydrotetracycline , glucose monohydrat, cellelysering buffer, DNA-polymerase , PCR primere , Tris- acetat -EDTA- og ethidiumbromid .