Hvorfor var du nødt til at vaske brøndene efter hvert trin?

Vask af mikropladebrøndene efter hvert trin i forskellige biokemiske og molekylærbiologiske assays såsom ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), DNA/RNA-isolering, PCR og Western Blotting er en væsentlig del af den eksperimentelle protokol. Formålet med vasketrin er at fjerne resterende reagenser, reaktionskomponenter eller enhver forurening, der kan interferere med efterfølgende trin eller påvirke analysens nøjagtighed og specificitet.

Her er et par grunde til, at vasketrin er nødvendige:

Fjernelse af ubundne stoffer: Vasketrin efter tilsætning af reagenser eller antistoffer hjælper med at fjerne eventuelle ubundne stoffer, såsom overskydende antistoffer, uspecifikke bindingsmolekyler eller reaktionskomponenter, der ikke er fanget eller bundet til den faste fase. Dette sikrer, at detektionssignalet er specifikt og fri for baggrundsinterferens.

Minimering af krydskontaminering: Vasketrin reducerer effektivt risikoen for krydskontaminering mellem prøver. Dette er især vigtigt, når flere prøver behandles samtidigt, da det forhindrer overførsel af reaktionskomponenter eller kontaminanter fra en brønd til en anden. Vask hjælper med at bevare integriteten og nøjagtigheden af ​​individuelle prøveresultater.

Effektiv fjernelse af forstyrrende stoffer: Vask er nødvendig for at fjerne stoffer, der kan forstyrre de efterfølgende trin. I et ELISA-assay hjælper vask for eksempel med at eliminere ubundne konjugat-antistofkomplekser, hvorved baggrundsfarveudviklingen reduceres og den kolorimetriske reaktions specificitet forbedres. Ved PCR fjerner vask nukleotider, primere og polymeraser fra tidligere amplifikationscyklusser, hvilket minimerer risikoen for overførselskontamination og sikrer nøjagtig amplifikation i næste cyklus.

Standardisering og reproducerbarhed: Ved at følge standardiserede vaskeprocedurer sikrer forskerne, at forholdene er konsistente på tværs af eksperimenter og mellem forskellige laboratorier. Denne konsistens er afgørende for at opnå pålidelige og reproducerbare resultater.

Vaskeproceduren kan involvere brug af en flerkanalspipette eller en automatiseret pladevasker til at dispensere og aspirere vaskebufferen. Vaskebufferen er typisk en bufret saltvandsopløsning, der ligner sammensætningen af ​​den oprindelige buffer, der blev brugt i assayet, men som ikke indeholder nogen reaktionskomponenter.

Tilstrækkelig vask uden overvask er afgørende. Overvaskning kan resultere i tab af væsentlige komponenter bundet til den faste fase og påvirke analysens følsomhed. Derfor er vaskeprotokoller omhyggeligt designet til at opnå optimal fjernelse af uønskede stoffer, mens integriteten af ​​de immobiliserede molekyler eller analytter af interesse bevares.