Fluorescensdetektion: Principper og anvendelser

Fluorescens bruges som en detektionsmetode i mange kemiske og biologiske molekylære karakteriseringsteknikker.

Fluorescens grundlæggende

• Fluorescens opstår, når lys med en bestemt bølgelængde (ofte ultraviolett) rettes mod et materiale, der kan absorbere dette lys og udstråle lys ved en anden, længere bølgelængde. Ofte er denne emission synligt lys, hvilket får materialet til at virke som om det glyder i mørket.

Direkte fluorescens

• Nogle molekyler er naturligt fluorescerende og kan studeres ved direkte fluorescens. Faktorer, herunder nærhed til andre molekyler og opløsningsmiddelinteraktioner, kan ændre et molekyles fluorescensegenskaber. Disse ændringer giver information om molekylære interaktioner, aggregering og selv-sammensætning.

Immunofluorescens

• Ved immunofluorescens bruges fluorescerende antistoffer til at afsløre visse cellulære strukturer. Dette kan bruges til at identificere celler af forskellige typer, visualisere specifikke cellorganeller, måle celledstofskifte og til mange andre formål.

Fluorescensmærkning af DNA

• Selvom DNA selv kun er svagt fluorescerende, bygger mange molekylærbiologiske teknikker på at forberede fluorescerende DNA-komplekser til kvantificering, sekvensering og sporning.

Andre metoder

• Listen over fluorescensdetektionsmetoder er lang og variabel. Proteiner kan designes til at indeholde fluorescerende domæner, hvilket gør det muligt at spore dem inden for celler og endda inden for organismer. Fluorescens kan bruges i kromatografi til at adskille et interessant molekylde fra en blanding og i biofysik til at bestemme hastigheden af konformationelle ændringer af et enkelt molekyde.