Tissue Culture Tips

Nogle celler overholde bunden af ​​petriskåle eller forblive suspenderet i væsken. Celler kan være af vegetabilsk eller animalsk oprindelse . Celler , der anvendes i vævskulturer kan være primære celler , hvilket betyder at de blev høstet direkte fra en organisme , eller en cellelinie, som er blevet opretholdt i kultur. Cellelinjer er ofte kræftceller , og det skal overvejes, når du planlægger eller tolkning eksperimenter.
Forkæl Cells forsigtigt

klæbende celler er fjernet fra deres petriskål for passage af skrabning eller med en protease , der generelt trypsin og EDTA . Skrabning dræber mange celler, og bør kun anvendes, når de forbereder cellelysater (flydende tilberedninger af celleindhold til analyse ), eller når trypsin /EDTA absolut skal undgås.

Trypsinizing fjerner ikke kun de proteiner , der overholder celler til fadet men de fleste andre proteiner på cellens membran , også. Celler bolden op og tage noget tid , som regel natten over , for at genetablere en obligation med fadet. Tilføjelse af en minimal mængde af trypsin - omkring 1 ml til en 25cm2 -kolbe - rocking kolben i fem sekunder eller mindre til pels monolag og derefter hælde eller aspirere overskydende trypsin vil reducere mængden af ​​trypsin , som monolag er udsat for. Lad cellerne hvile i inkubatoren under trypsinbehandling .

Efter at cellerne glide væk fra bunden af ​​skålen , tilføje medier med serum opsuges lysatet op og ned pipette forsigtigt. Lad lidt medier til at forblive i skålen , som du pipetteres op og ned flere gange for at bryde ud klumper og få en endnu suspension .

Må ikke suge bobler i pipetten . Også, ikke kraftigt blande eller vortex celle suspension; cellerne er meget skrøbelige i denne rullede op tilstand.
Til Heat inaktivere eller ikke at opvarme inaktivere

Når cellekulturteknikker var i deres vorden , føtalt bovint serum ( FBS ) blev kendt for at indeholde komplementproteiner , der er immunsystemets proteiner, lyserer celler . Komplementproteiner ikke er ønskelige i cellekultur. Heat - inaktivere FBS ved 56 grader Celsius i 30 minutter vil gøre komplementproteiner inaktive . Foropvarmning FBS til 37 grader C er også nok til at inaktivere komplementproteiner .

I de tidlige dage , varme inaktiverer FBS også dræbt mycoplasma og andre forurenende stoffer . På det tidspunkt var filtersterilisering udført med 0.45um filtre. I dag har vi Filtersteriliser FBS og medier gennem 0.1um eller endda 0.04um filtre. Ingen mycoplasma vil glide gennem det

Dette efterlader os spørgsmålet om, hvorvidt eller ikke at opvarme inaktivere

varmeinaktivering nedbryder alle dele af FBS - . . Såsom vitaminer , aminosyrer og vækstfaktorer - . eventuelt under tærsklen for nogle pertentlig cellelinjer
p Hvis du arbejder med en langsomt voksende eller pertentlig cellelinie , overveje blot filtersterilisere dine FBS. Du kan finde dette øger robustheden af ​​dine celler.
Hoteltilbud