Cellebaserede ELISA -protokollen

ELISA eller enzymmaerket assay , der bruges som et diagnostisk redskab i medicin og i biologisk forskning for at kvantificere mængden af ​​et bestemt protein. ELISA bruger antistoffer til påvisning af proteinet af interesse og et reagens, som producerer en farve. Mængden af ​​farve angår mængden af ​​protein . Cellekultur

Celler bør placeres i brøndene på en 96 -brønds plade med 100 mikro- liter vækstmedier , og cellerne tilbage til at blive aflejret natten . Hvis du studerer cellernes reaktion på en faktor bør celler være serum - sultet i 24 timer og derefter stimuleret med faktor under studiet.
Fixation og Primary Antibody

Efter fjernelse af medierne, behandles cellerne med et fiksativ , såsom 3 procent formaldehyd eller metanol. Cellemembranen skal permeabiliseret til at tillade antistoffet at trænge ind i cellen. Permeabilisering kan opnås ved anvendelse af 0,1 procent Triton, hvis der ikke tidligere er blevet anvendt methanol. Ikke-specifik binding kan forebygges ved anvendelse af 10 procent føtalt kalveserum fortyndet i phosphatbufret saltvand . Efter fjernelse af blokken , kan det primære antistof påføres og inkuberes i en time.
Sekundært antistof og Stain

Fjern det primære antistof , og vask tre gange . Tilføj et sekundært antistof koblet til en påvisning middel, såsom peberrodsperoxidase. Der inkuberes i en time. Wash Tilføj kemiluminescerende substratopløsning . Udvikle og scanne plade til farveintensitet .
Hoteltilbud