Intracellulær farvning Protokol for Flowcytometri

Flowcytometri er et værktøj , som er nyttige i studiet af celleproteiner . Det udnytter emission af lys eller fluorescens fra proteiner i cellen . Antistoffer eller sonder mærket med fluorescens bruges til at undersøge specifikke proteiner . Flowcytometri anvendes til at diagnosticere en række sygdomme , herunder cancer , men er også anvendelige i medicinsk forskning. Bør fastsættes Fastsættelse Cells

Celler til at opretholde stabiliteten af de intracellulære proteiner. En række fikseringsmidler kan anvendes, såsom formaldehyd eller iskold acetone. Efter fiksering , skal permealized at tillade antistoffet at komme ind i cellen cellemembranen. Rengøringsmidler såsom Triton eller NP-40, kan eller iskold methanol bruges til at lave huller i cellemembranen .

Farvning

Vask cellerne i blokerende buffer 0,5 procent bovint serumalbumin fortyndet i phosphatpufret saltvand, BSA /PBS. Cellerne inkuberes i blokerende buffer til at reducere ikke-specifik binding . Tilføj primær antistof fortyndet i blokeringspuffer og lader til at inkubere ved stuetemperatur i optimeret tidsrum. Vask med blokerende buffer .
Analyse

Inkubér sekundære antistof , som er mærket med en fluorescerende tag, ved stuetemperatur i 30 minutter. For at fjerne ubundne antistof udvaskede celler i blokeringsbuffer . Spin celler i en pille og derefter resuspenderes i PBS og analysere på flowcytometer .
Hoteltilbud