Test af bakteriecellelivsevne: Metoder og anvendelser

Bakteriecellelivsevne-tester bruges til at bestemme, om en prøve af celler er i live. Tester kan bestemme, om en prøve er i live, selv når cellerne ikke producerer. Testmetoderne strækker sig fra simple farvning og test af reproduktionsevne til mere avancerede teknikker. Cellelivsevne-tester er især nyttige til at bestemme en bakteriestams unikke fysiologi. Disse tester omfatter at udsætte en bakterie for en bred vifte af miljømæssige betingelser.

Celledivision

Cellelivsevne kan bestemmes simpelt ved bakteriens evne til at reproducere. Dette bestemmes ved at dyrke bakterier på en agar-plade og derefter placere pladen under et mikroskop. Mens du kigger under mikroskopet, skal du tælle, hvor mange Colony Formation Units (CFU'er) der er til stede. Ved at bruge denne test kan du sammenligne cellelivsevnen af forskellige stammer ved at sammenligne CFU-tallene. Jo flere CFU'er du har, jo højere cellelivsevne.

Gram-farvning

Gram-farvning tillader dig at visualisere tilstedeværelsen af bakterier i en prøve, fordi cellerne vil farves lilla. Denne test udføres mest almindeligt ved at bruge et glas-mikroskop-objektglas med en lille prøve af bakterier placeret på det. Bakterieprøven varmes kortvarigt, så den vil hæfte, og derefter farves den med krystalviolett-løsning. Prøven farves efter tilstrækkelig inkubationstid for en bakteriekultur. Efter farvning vaskes prøven og placeres under et mikroskop og ses. Alle celler, der er vokset, vil være farvet lilla.

Test af specifikke gen-transscript

Når en organisme er i live, skal den bruge transkription for at hente information fra sit DNA. Efter informationen er transkriberet til messenger RNA, kan det bruges i en proces kaldet translation til at producere aminosyrer. Disse aminosyrer konfigureres så til de proteiner, der tillader en organisme at overleve. Ved at teste for transkription af specifikke gener, er det muligt at se, om bakterien er i live eller ej. Dette kan detekteres ved hjælp af polymerase-kædereaktion (PCR)-metoder eller microarrayer.

Stabilitet af ribosomalt RNA

Når enhver levende organisme dør, begynder dets RNA og DNA at nedbrydes. Årsagen til at teste ribosomalt RNA i stedet for almindeligt RNA er, at der er meget mere ribosomalt genetisk materiale i enhver organisme end almindeligt RNA. Da det er til stede i så stor mængde, kræver det ikke PCR-forstærkning som almindeligt RNA ville. Cellelivsevne ville korrelere med intakt RNA.

Permeabilitet af cellemembranen

En celle skal aktivt udveksle materialer gennem sin cellemembran for at opfylde sine energi-, vand- og ernæringsbehov. Hvis en celle ikke er i live, kan den ikke befale sin cellemembran til at fjerne affald og absorbere nødvendige kosttilskud til overlevelse. Ved at udsætte en cellemembran for fluorescerende forbindelser, kan en prøve testes for permeabilitet. Denne permeabilitet måles så ved fluorescens-niveauet under UV-lys. Højere fluorescens-niveauer korrelerer med højere permeabilitetsniveauer. Dette tillader måling af cellelivsevne gennem fluorescens.