ELISA-test: Forståelse af antistofdetektion og anvendelser

Hvad er ELISA?

ELISA-testen (enzyme-linked immunosorbent assay) er den mest almindelige kommercielle test til screening for antistoffer. Bruges til screening for stofmisbrug, graviditet, AIDS, hepatit m.v. Populær p.g.a. nem brug og lav pris.

Du har brug for

• Serumprøve
• ELISA-plade
• Antigener, der konjugerer det testede antistof
• Enzym-koblede antistoffer (sekundære antistoffer)
• Enzym-koblet farveskiftindikator
• Husholdningspapir
• Briller

Fremgangsmåde

1. Påbring et kendt antigen på overfladen af flere brønde. Dæk hver brønd med 50 µL IgG-væske. Lad stå 5 min. Skyl brøndene med vand. Gentag skylning 5 gange. Tør på husholdningspapir – rør ikke af.
2. Tilføj serumprøver (kropsvæske) til pladen. Disse kan indeholde konjugat og konkurrent-løsning, der binder, hvis antistoffer er til stede. Serum skal fordunnes til at konjugere med antigen fra trin 1.
3. Tilføj et protein (f.eks. kasein) til brøndene. Forhindrer andre proteiner i at hæfte sig til pladen.
4. Vask pladen: skyl med vand hældt blidt over brøndene. Plet pladens side på papir for at fjerne overskydende vand. Gentag 4 gange. Rør ikke af. Tilføj antistoffet, der matcher det testede.
5. Vask igen (5 gange samlet). Fjerner ubundne antigen. Brøndene indeholder nu kun antistof-antigen-komplekser. Vask for at fjerne ubundne enzym-koblede antistof-konjugater.
6. Tilføj sekundære antistoffer (anti-antistoffer). De binder til detektionsantistofferne. De er konjugeret med farveskiftindikator og antigen fra trin 1.
7. Vask igen (5 gange). Fjerner ekstra ubundne enzym-koblede antistoffer.
8. Påbring enzym-koblet farveskiftindikator. Brøndene med de testede antistoffer skifter farve.
9. Observér brøndene for farveskift. Angiver tilstedeværelsen af antistoffet i væskeprøven.