Hvorfor lægger du røntgenfilmen oven på nylonmembranen i bakken?

I forbindelse med molekylærbiologiske teknikker, såsom Southern blotting eller Northern blotting, placeres røntgenfilm typisk ikke oven på nylonmembraner i bakkerne. I stedet overføres nylonmembraner indeholdende elektroforetisk adskilte nukleinsyrer (DNA eller RNA) ofte til faste understøtninger, såsom Whatman-papirer, efterfulgt af bagning eller UV-tværbinding for permanent at immobilisere nukleinsyrerne på membranerne.

Røntgenfilm placeres ved siden af ​​eller i tæt kontakt med disse nylonmembraner, sædvanligvis pakket separat i plastfolie, når autoradiografi udføres. Autoradiografi tillader påvisning og visualisering af radioaktivt mærkede nukleinsyrer på membranerne ved at placere røntgenfilm ved siden af ​​dem i kassetter (lukkede lystætte bærere, der holder filmen tæt til membranen).

Når det radioaktive materiale henfalder, frigiver det energi i form af fotoner eller elektroner, som interagerer med sølvhalogenidkrystallerne på røntgenfilmen. Dette fører til udvikling af mørke pletter eller bånd på røntgenfilmen efter bearbejdning, svarende til positionerne af de radiomærkede nukleinsyrer på membranen.

Derfor placeres røntgenfilmen ikke direkte oven på nylonmembranen, men bruges separat til at fange strålingen udsendt af de radioaktive prober hybridiseret til nukleinsyrerne på membranen.