|  | Sundhed og Sygdom >  | Kirurgi og procedurer | Hjernekirurgi

Flow cytometry: Principper, anvendelser og dataanalyse

Flow cytometry måler simultant flere fysiske og fluorescensparametre på enkelte celler i suspension med høj gennemstrømning (10.000–50.000 begivenheder/sek).

Kerne principper

  • Hydrodynamisk fokusering: Prøvekerne centreret i sheath væske → enkelt-fil interrogation.
  • Lysspredning: FSC (forward scatter ≈ størrelse), SSC (side scatter ≈ granulæritet/kompleksitet).
  • Fluorescens: Fluorokrom-konjugerede antistoffer binder mål-antigener; lasere exciterer; detektorer fanger emission (båndpas filtre).
  • Kompensation: Spektral overlap korrektion mellem fluorokromer.
  • Gating: Sekventielle plots isolerer populationer af interesse (fx lymfocyter → singletter → CD3+ → CD4/CD8).

Vigtigste anvendelser

FeltAnvendelser
ImmunofenotypningLymfocyt undergrupper (T/B/NK), aktiveringsmarkører, Tregs, udmattelse (PD-1, TIM-3)
Hematologiske maligniteterLeukæmi/lymfom diagnostik (CD markører), MRD (10⁻⁴–10⁻⁶), linjetilknytning
Cellecyklus / ProliferationKi-67, DAPI/PI, BrdU/EdU — S/G2/M fraktion
ApoptoseAnnexin V / 7-AAD eller PI — tidlig/sen apoptose
FunktionelCytokin fangst (ICS), phospho-flow (pSTAT, pERK), calcium flux, ROS, mitokondrielt potentiale
Cellesortering (FACS)Højrenhedsisolering til genomik, kultur, transplant

Moderne fremskridt

  • Spektral cytometri (40+ parametre, autofluorescens unmixing)
  • Masse cytometri (CyTOF) — metal-mærkede antistoffer, 40+ parametre, ingen spektral overlap
  • Imaging flow cytometri (morfologi + fluorescens)
  • Single-cell multiomics (CITE-seq, REAP-seq: overfladeprotein + transkriptom)

Kvalitetskontrol

  • Daglige QC perler (justering, sensitivitet, fluorescens stabilitet)
  • Standardisering: EuroFlow, ICCS, CYTOF paneler.
  • Biosikkerhed: BSL-2 for ufixerede humane prøver; fixering til transport.

Hjernekirurgi