T- cellekulturen protokoller

T-celler , der hører til en familie af immunceller kaldet lymfocytter, der genereres under en adaptiv immunreaktion. T-celler stammer fra knoglemarv og modne i thymus . Der findes flere forskellige typer af T-celler, hver med en anden funktion. T-celler adskiller sig fra hinanden ved den vedlagte T- celleantigenreceptoren . En delmængde af T-celler bærer CD4 markør og hjælper til at inducere et immunrespons. Kilder af T-celler

T-celler kan fås fra forskellige kilder, herunder milt , lymfeknuder og thymus , men perifert blod er den mest tilgængelige kilde til T-celler til kultur formål . Blodprøver er grundigt screenet for infektioner og andre forurenende stoffer og omhyggeligt håndteret under en sikkerhedskabinet . T- celler dyrkes af flere grunde , herunder toksicitet målinger og for at studere immunologiske vaccine svar.
Isolation

T-celler er almindeligvis adskilt fra helblodprøver af tæthed gradient separation, som T- celler er mindre tæt end røde blodlegemer , såsom erythrocytter , og derfor udvindes ved centrifugering. En passende neutral saltopløsning til blodprøven , efterfulgt af en Ficoll Isopaque løsning. Ficoll Isopaque har en massefylde større end T-celler , men mindre end erythrocytter og under centrifugering udgør et mellemlag mellem de to celler, således at T-celler at blive fjernet fra toppen. T-cellerne er yderligere centrifugeret , supernatanten fjernes , og en lille portion tælles for at bestemme cellelevedygtighed . Cellerne er enten anvendt direkte til eksperimenter eller kryokonserveret til fremtidig brug.
Kryopræservering

Kryopræservering reagenser er forberedt på forhånd for at undgå T-celle nedbrydning ved værelse temperatur. Hvis det ikke er muligt, er cellerne holdes på is eller i køleskab . Reagenser består af celledyrkningsmedier og 10-13 procent humant serumalbumin ( HSA )-protein , samt celledyrkningsmedier og 10 procent dimethylsulfoxid (DMSO) . DMSO minimerer dehydrering, pH-ændringer , og elektrolyt koncentration ændringer i forbindelse med frost. T-celler resuspenderes i reagenset indeholdende celledyrkningsmedier og HSA i kryorør . Reagenset indeholder DMSO tilsættes langsomt til cellerne og svinges forsigtigt rundt . Cellerne overføres derefter til en indefrysning beholder indeholdende isopropanol for at sikre en gradvis temperatursænkning og opbevares.
Optøning

Når T- celler er optøet, en kryorør fjernes oplagring og inkuberet ved 37 grader Celsius. Efterfølgende passende optøning medium langsomt tilsat til cellerne , indtil det dobbelte af volumen er nået, overføres til et separat rør og centrifugeret . Benzonase er undertiden tilsat til optøning medium for at forhindre sammenklumpning af døde T-celler. Den centrifugeres pellet er reageret i cellekultur medierne og cellernes levedygtighed vurderes . T-cellerne er derefter klar til brug for de respektive eksperimenter.
Hoteltilbud