Sådan måler katalase Koncentrationer

Catalase er en biologisk ( organisk ) katalysator. Dette enzym er en af de mest potente kendte katalysatorer og har gavnlige virkninger på det menneskelige legeme og er afgørende for liv. Catalase fungerer som en katalysator til at fremskynde nedbrydningen af hydrogenperoxid. Hydrogenperoxid er en metabolisk biprodukt , der er giftig for cellerne hvis de ikke fjernes . Catalase hjælper med at nedbryde hydrogenperoxid i vand og ilt. Catalase hjælper også oxiderende andre giftstoffer såsom phenoler, myresyre , formaldehyd og alkoholer . Hvad du har brug
Two 110 ml chromogen i fosfatbuffer
300 pi substrat - 30% hydrogenperoxid
400 μL.HRP - peberrodperoxidase i fosfatbuffer
60 ml fosfat buffer
250 ml prøve fortynder tensid i fosfatbuffer
To 30 mL substrat fortynder fosfatbuffer
To 30 mL stopreagens - natriumazid
To hætteglas 160 U /hætteglas standard katalase
Spektrofotometer
10 ul justerbare pipetter
1 cm vejlængde spektrofotometriske kuvetter
1,5 ml polypropylen mikrorør med hætte
Reagensglas - 12x75 millimeter ( 2,5 ml hver)
Timer
Demineraliseret vand

Vis Flere Instruktioner
1

Forbered bestanden af katalase , at du vil være at måle ved at tilsætte 200 mikroliter ( ul) deioniseret vand til katalasen koncentrationerne i 50 milliliter (ml) hætteglas . Niveauet for catalese koncentration bør være 160 enheder per milliliter ( U /ml).
2

Tilføj 30 pi fortyndet katalase i rør . Tilsæt 500 pi af substrat (hydrogenperoxid - 10mm H2O2 ) i hvert rør . Vær omhyggelig med ikke at plaske hydrogenperoxid , når man arbejder med det.
3

Inkubér enkelte rør i et minut ved stuetemperatur.
4

Tilføj 500 & mu ; L reagens til hvert hætteglas. Cap hvert hætteglas og blandes ved at vende hætteglasset op og ned. Må ikke hvirvle blandingen ryste hætteglasset eller røre det med en genstand .
5.

Tilsæt 20 pi af hver reaktionsblanding i reagensglassene . Tilsæt 2 ml af HRP- reagens i hvert reagensglas. Igen, blande opløsningen ved at vende reagensglassene flere gange .
6

Inkubér løsning igen, denne gang i 10 minutter ved stuetemperatur.
7.

Læs absorbansen niveau af opløsningen med et spektrofotometer . Spektrofotometeret måler lyset bølgelængder for at bestemme præcis, hvad stoffer er til stede og og hvilke koncentrationer. Denne metode vil give en nøjagtig måling af katalase koncentrationer. Oplysningerne er nyttig i forbindelse med interaktionen af katalase med hydrogenperoxid, som i dette eksperiment, og som foregår naturligt i den menneskelige krop.
Hoteltilbud

Relaterede Sundhed Artikler