Competitive Binding Assay Protocol

The kompetitivt bindingsassay er et eksperiment , der bestemmer bindingskapaciteten af proteiner eller kemikalier til specialiserede proteiner, der findes på en celleoverflade , kaldet receptorer. Metoden er ofte anvendes i medicinsk forskning, men er også i stand til at bestemme hvilke lægemidler binder til receptorer og ændre receptor aktivitet , hvilket igen kan ændre celle adfærd . Cell Forberedelse

genopslaemmes celler i iskoldt phosphatpufret saltvand (PBS). Mål proteinkoncentration at bekræfte ens protein niveauer ved hjælp af en specialiseret kommercielt tilgængelig proteinanalyse .
Assay

Tilføj en radioaktivitet - mærket protein kendt for at binde til receptoren , den ligand til cellen eller vævet suspension. Tilsæt konkurrent, som er testlægemidlet eller protein , der undersøges , og der inkuberes med radioaktiv ligand og cellesuspensionen . En række koncentrationer af test narkotika bør undersøges . Efter inkubation separat bundet og ubundet ligand og måle radioaktivitet.
Dataanalyse

Den sædvanlige foranstaltning, der skal afgøres, er halvdelen af ​​den maksimale koncentration, der hæmmer receptoren også kendt som IC50 . Dette beregnes ved at plotte koncentrationen på en logaritmisk skala på X-aksen af en graf med Y-aksen repræsenterer procentdelen af inhibering ; en sigmoid kurve , der er en S-form , skal genereres . IC50 er den 50 procent hæmning punkt , og den tilsvarende koncentration kan aflæses fra grafen.
Hoteltilbud