Hemoglobin elektroforese: Prøveforberedelse og protokol

Hemoglobin-prøver kan opnås fra et eksperimentelt subjekt eller en patient og derefter adskilles i bestandsdele ved hjælp af elektroforese i et laboratorie-miljø. Før hemoglobin kan køres gennem geler ved brug af elektroforese, skal det forberedes, så det korrekt og præcist adskilles under processen. Denne protokol antager, at de korrekte geler og passende elektroforese-teknikker vil blive brugt, ifølge den ønskede analyse.

Det du har brug for

• Hemoglobin-prøve (fra blod)
• Eppendorf-rør
• Laboratorie-fryser ved -20 grader Celsius
• Gel-elektroforese kit

Instruktioner

1. Forberedelse: Overfør hele blodprøven, der skal bruges til elektroforese, til et Eppendorf-rør. Sørg for, at røret er ordentligt lukket.

2. Frys denne prøve i en fryser, der er egnet til opbevaring af organiske materialer såsom blod, ved -20 grader Celsius. Opbevar indtil helt fryset (nogle timer eller måske over natten).

3. Afrost prøven, uden vortexing eller blandning, og fjern supernatanten; dette er hemolysaten, der vil blive brugt til elektroforese.

4. Tilføj de buffers, der er mest velegnede til gel- og elektroforese-forholdene for at køre supernatanten-prøven.

5. Indlæs og kør gel-elektroforese-eksperimentet ifølge det udstyr og gel, der bruges.

Moderne metode: Cæluloseacetat- eller agaros-gel elektroforese (alkalisk pH 8,4-8,6) + citrat-agaros (sur pH 6,0-6,2) for variant-separation (HbA, HbA2, HbF, HbS, HbC, HbE). Automatiseret HPLC (High Performance Liquid Chromatography) / CE (Kapillær-elektroforese) er guldstandard (Bio-Rad Variant, Sebia Capillarys). Kvantifikation: HbA2 >3,5% = beta-thalassemi trait, HbF forøget = HPFH/beta-thal/drugs. Nyfødt-screening (tør-blod-prik) obligatorisk i mange lande.