N terminal sekventering protokol

Edman-nedbrydning - en velkendt fremgangsmåde til at identificere den N- terminale aminosyre i et protein - kræver spaltning af aminosyren , efterfulgt af identifikation ved hjælp af kromatografi eller elektroforese. Automatiserede processer accelerere N- terminal sekventering. Fakta

Proteiner produceret i de enkelte celler fungerer som hormoner, enzymer og andre vigtige regulatorer . Genetisk mutation resulterer i en unormal protein kan have alvorlige sundhedsmæssige konsekvenser.
Proces

N-terminale aminosyre spaltes ved behandling med en af ​​flere reagenser , så hydrolyseret til dannelse af en særskilt aminosyre. Tyndtlagskromatografi, HPLC eller elektroforese bestemmer størrelsen af ​​aminosyren , og sammenligner den med en kendt størrelse standard. Den nye N-terminale ende af det resterende protein kan ligeledes spaltes til identifikation.

Automation

Applied Biosystems ledet udviklingen af ​​automatisere Edman nedbrydning, som binder et oprenset protein til en membran og behandler det med phenylisothiocyanat . Den frie aminosyre er automatisk sprøjtes ind i en HPLC- system til identifikation .