Cellebaserede ELISA -protokollen

ELISA eller enzymmaerket assay , der bruges som et diagnostisk redskab i medicin og i biologisk forskning for at kvantificere mængden af et bestemt protein. ELISA bruger antistoffer til påvisning af proteinet af interesse og et reagens, som producerer en farve. Mængden af farve angår mængden af protein . Cellekultur

Celler bør placeres i brøndene på en 96 -brønds plade med 100 mikro- liter vækstmedier , og cellerne tilbage til at blive aflejret natten . Hvis du studerer cellernes reaktion på en faktor bør celler være serum - sultet i 24 timer og derefter stimuleret med faktor under studiet.
Fixation og Primary Antibody

Efter fjernelse af medierne, behandles cellerne med et fiksativ , såsom 3 procent formaldehyd eller metanol. Cellemembranen skal permeabiliseret til at tillade antistoffet at trænge ind i cellen. Permeabilisering kan opnås ved anvendelse af 0,1 procent Triton, hvis der ikke tidligere er blevet anvendt methanol. Ikke-specifik binding kan forebygges ved anvendelse af 10 procent føtalt kalveserum fortyndet i phosphatbufret saltvand . Efter fjernelse af blokken , kan det primære antistof påføres og inkuberes i en time.
Sekundært antistof og Stain

Fjern det primære antistof , og vask tre gange . Tilføj et sekundært antistof koblet til en påvisning middel, såsom peberrodsperoxidase. Der inkuberes i en time. Wash Tilføj kemiluminescerende substratopløsning . Udvikle og scanne plade til farveintensitet .
Hoteltilbud

Relaterede Sundhed Artikler