PCR Basics

Polymerase Chain Reaction (PCR) er en metode til DNA-replikation . Metoden er opkaldt efter DNA-polymerase , et enzym anvendes til at katalysere processen med DNA-replikation . Kary Mullis udviklet teknikken i 1984 og blev tildelt Nobelprisen i kemi for sit arbejde i 1993. Anvendelser af PCR

Almindelige anvendelser af PCR omfatter DNA fingeraftryk (hvor DNA-fragmenter er isolerede og sammenlignet med eksisterende data ) , analyse af ekstremt små prøvemængde ( som gør det muligt for forskerne at rekonstruere uddøde organismer og afdøde historisk . tal ) og sygdomsdiagnose (herunder viral DNA og kræftforskning )

PCR Components

Nødvendige komponenter og reagenser af en PCR reaktion er: genomisk DNA ( skabelonen til gentagelse); to primere ( en frem og et reverse ) komplementær til den DNA-template -sekvens; en reaktion cocktail ( herunder Taq-polymerase , og en pufferopløsning , der tilvejebringer et levedygtigt miljø, hvor reaktionen vil forekomme ); og substrat for Taq enzym ( nukleotider , der vil hjælpe "bygge " de enkelte tråde).

Steps PCR

trin i reaktionen er : Denaturering ( i hvilken temperaturen hæves til at adskille DNA- templatestrengene ); Annealing af primeren (i hvilken temperatur afkøles til fremme fritflydende primersekvenser at overholde isolerede DNA templatestrenge ); og forlængelse ( i hvilken Taq-polymerase klæber til primeren og bruger fritsvævende nukleotider til at replikere hver isoleret DNA- template-strengen ) . Gentagelse af denne proces flere gange , vil isolere hver replikeret sekvens fra sin oprindelige DNA-skabelon . Hver gentagelse eksponentielt forøger mængden af ​​replikeret DNA , indtil der er en tilstrækkelig mængde for den ønskede eksperiment. For optimal temperatur og andre forhold , se Yale universitetets " Designing PCR programmer" i Ressourcer nedenfor.

Stadier af PCR

Reaktionen kan også beskrives i tre faser Amplifikation ( hvorunder DNA eksponentielt replikeres ); Level -Off ( hvorunder Taq-polymerase mister aktivitet); og Plateau ( på hvilket tidspunkt ikke mere kan produceres i den aktuelle reaktion). For en interaktiv demonstration af PCR-reaktionen , se University of Utahs "PCR Virtual Lab " i Ressourcer nedenfor.
Hoteltilbud