Plaque Assaymetode

Et assay er en teknik, der anvendes til at isolere og oprense virus og til at bestemme virustitere ( den laveste koncentration af virus, der resulterer i infektion ) . En plaqueanalyse , oprindeligt kaldt en virologisk analyse , blev udviklet til at måle og tælle infektivitet af bakteriofager . Ifølge Biologi - Online.org , blev det senere også anvendt til at tælle pattedyrvira . Fakta

plak er en sammenflydende , monolagskultur af celler. Det danner som et resultat af infektion af en af ​​cellerne ved en enkelt viruspartikel ifølge Biologi - Online.org . Når cellen er inficeret, virusset replikerer og til sidst dræber cellen . Desuden spreder de nyligt replikerede viruspartikler , inficere og dræbe de nærliggende celler.
Function

en plaqueanalyse , er kulturen først farves med et bestemt farvestof. Denne die pletter kun levedygtige (levende ) celler , ifølge Biologi - Online.org . Som et resultat, de døde celler vises ufarvet i kultur, mod den farvede baggrund. I øjeblikket er plaqueanalyse anvendes til påvisning celler, der producerer antistoffer, der ødelægger erythrocytter ved hæmolyse .

Features

Erythrocyter er celler (også kaldet røde blodlegemer ), der indeholder et hæmoglobin og transportere ilt og kuldioxid i blodet fra lunger og væv. Hæmolyse opstår, når erytrocytter bryde åbne og frigiver hæmoglobin , ifølge Biologi - Online.org . Som et resultat, i plakassay , grundlaget er klart plak og indikerer, at de røde blodlegemer er blevet hæmolyserede af antistofferne.
Metode Del I

Ten - folds fortyndinger af en virus bestand er forberedt før udførelse af en plaqueanalyse og 0,1 ml aliquiots er sat på til cellemonolagene . Denne blanding inkuberes i et tidsrum, således at viruset har tid til at angribe cellerne. Desuden er de monolagene dækket af et næringsmedium , der indeholder et stof ( som regel agar ) , ifølge " Afsløring Virus : A plaqueanalyse " af Vincent Racaniello . Næringsmediet danner en gel og efter Kulturen inkuberes de oprindelige inficerede celler frigive virale afkom. Gelen at begrænse spredningen af virusset til omkringliggende celler , og som et resultat er det infektiøse partikel frembringer en cirkulær zone kaldet plak. Med tiden plaque vokser til en størrelse synlig med det blotte øje og farvestoffer er brugt til at forbedre visning .
Metode Del II

Virustiteren beregnes plaque -dannende enheder , kaldet PFU , per milliliter . De tælles og minimeret fejl , er det kun plader, der indeholder mellem 10 og 100 plakker talt. I henhold til " registrerer virus : En pletsæt " for hver 100 optalte plaques samme titer vil variere med plus eller minus 10 procent. Derfor skønnede fejl en plaqueanalyse er omkring 10 procent , når de udføres korrekt.
Hoteltilbud