Sådan Forbered agarplader

Molekylærbiologi og bakteriologi brug agarplader til kultur mikroorganismer, såsom bakterier til eksperimenter. Agar er det middel, der størkner eller geler , et flydende næringsmedium kræves af mikroorganismen til at overleve og vokse. Når overført til en agarplade bakterierne vokse i tydelige kolonier ( hvis der dyrkes ved lave koncentrationer) eller pletter ( hvis der dyrkes ved høje koncentrationer ) og kan høstes til analyse. Biologer forberede agarplader , som processen kræver adgang til laboratorie - reagenser og-maskiner og en god forståelse af molekylær biologi og sterile teknikker. Ting du skal
Handsker
kittel
Ansigtsmaske
bunsenbrænder
laminær strømning
Sterile petriskåle
10g bactotrypton
5g gærekstrakt
15g agarose
1mL 1N NaOH
sterilt destilleret vand
Glasflaske
Autoklave tape
Autoklave
Kosttilskud , fx antibiotika, såsom ampicillin
Vis Flere Instruktioner

1

Sæt på passende beskyttelsesudstyr, herunder handsker , en kittel og en ansigtsmaske , og sanerende alle overflader . Arbejde ved siden af ​​en bunsenbrænder eller fortrinsvis i en steril laminær strømning . Dette forhindrer luftbårne urenheder fra at falde i agaren.
2

Fjern stakken af ​​petriskåle fra deres emballage, men spare op til ompakning agarpladerne . Mærk den ydre overflade af skålen ( ikke låget ) med den type agar og datoen for udarbejdelse. Lå pladerne ud som et enkelt lag med låg fjernet for at gøre hælde af agar lettere.
3

Bland bactotrypton , gærekstrakt og agarose sammen og tilsæt derefter natriumhydroxid (NaOH) . Tilføj sterilt destilleret vand for at opnå 1L af næringsstoffer medier. Opløsningen overføres til en glasflaske med mindst 1,5 l volumen. Løst skrue låget af flasken og mærke på datoen for udarbejdelsen og navnet på medierne . Placer en strimmel af autoklave tape på flasken og autoklaver den i 25 minutter. Lad flasken afkøles til ikke lavere end 45 grader (eller det vil hærde for tidligt ), men ikke højere end 50 grader Celsius. Du kan gemme flasker afkølet og størknet agar ved 4 grader Celsius og derefter varme, indtil flydende . Hvis det er nødvendigt for netop din eksperiment eller stamme af bakterier , tilsæt passende type og mængde af supplement såsom antibiotika. Hvis mediet er for varmt , vil kosttilskud blive ødelagt , så omhyggeligt kontrollere temperaturen af mediet , før du fortsætter .
4

Hæld en tilstrækkelig mængde af agar til halv- skålen fyldes mens agar er stadig varm og flydende . Sikre, at overfladearealet er helt dækket . Hæld ikke en stor mængde eller lad agar nå toppen af ​​fadet. Opbevar pladerne i en steril atmosfære ved at tillade bunsenbrænder eller laminar flow hætte til at køre kontinuerligt . Lad pladerne for at indstille og derefter erstatte lågene .
5.

Tør agarplader i cirka 30 minutter til en time i en ovn indstillet ikke højere end 37 grader Celsius. Alternativt kan du lade dem i laminar flow hætte i tre minutter eller på en dekontamineres laboratorium bænk i en lav trafik område , der ikke er utætte for en dag eller to. Tørring pladerne stopper enhver bakteriel løsning placeret på agaroverfladen fra blot at fortynde ud og glide ned, i stedet for at danne kolonier , der klæber til agaren.
6

gemme forsigtigt pladerne i mørke og ved 4 grader Celsius. Stak de tørrede agarplader med deres bunde til at tillade dig til klart at se på etiketterne og for at forhindre mikroorganismer og snavs falder ned agaroverfladen og forurener dem . Sæt retter tilbage i deres emballage , dæk med alufolie og tape emballagen lukket. Mærk de pakkede plader med deres indhold og dato for udarbejdelse. Du kan gemme pladerne i op til to måneder, og bør kassere dem efter det.
Hoteltilbud