Hvordan kan jeg line up DNA til analyse

? Agarosegelelektroforese er den mest almindelige metode til visuel DNA-fragment analyse, som gør det muligt for teknikere at visuelt Discern DNA-fragmenter baseret på størrelse . Agarosegelen opretholder et magnetfelt , og da DNA har en negativ ladning , det bevæger sig mod den positive ende af det magnetiske felt. Mindre DNA-fragmenter bevæger sig hurtigere gennem gelen og større fragmenter bevæger sig langsommere . DNA-fragmenter er fluorescerende farvet med et interkalerende middel, kendt som ethidiumbromid. Dette giver mulighed for sammenligning af flere elektroforesebehandlede DNA-prøver på en gel. Ting du skal
Agarosegel , 0,7 procent til 2 procent
Tris- borat - EDTA ( TBA) , tris - acetat - EDTA ( TAE ) , natrium lithiumacetat (LA), borsyre (SB) buffer KAYAK Ethidiumbromid
gelpåsætning farvestof
Gel bakke
elektroforese kammer
Handsker
beskyttelsesbriller
Pipette
Elektroforese kam
Vis flere Instruktioner
Forberedelse af en 0,7 procent agarosegel
1

afvejes 0,7 g agarose pulver og derefter placere i en stor (250 ml ) konisk kolbe.
2

Tilføj 100ml af en 1X ( regulær styrke) buffer ( TAE , TBE , SB eller LB buffer ) til den koniske kolbe med den agarosepulver .
3

Microwave eller varme ved hjælp af en bunsenbrænder for cirka en minut, indtil opløsningen bliver klar og agarose er opløst.
4

kolben Fjern fra varmekilden , og lad det køle af til 55 til 60 grader celsius.
5

Tilføj 1 pi ( mikroliter ) af ethidiumbromid til den afkølede agaroseopløsning ved hjælp af en passende størrelse pipette , sædvanligvis 1 ml . Swirl opløsningen blandes.
6

Hæld gelen langsomt ind i gelen bakken , sikres, at der ikke er nogen bobledannelse under denne proces. Hvis der ikke er leveret godt dæmninger med gelebakke , bruge afdækningstape til at danne dem .
7.

Placer en elektroforese kam forsigtigt ind i gelen , der sikrer en fast stilling, og i den rigtige retning . Elektroforese kamme kan variere meget på antallet af tænder , de har. Lad gelen sat for cirka 25 minutter
8

Gelen nedsænkes i den samme buffer bruges til at forberede den agaorse løsning - . I dette tilfælde en 1X buffer. Gelen nedsænkes i op til 5 ml flydende buffer .
Forberedelse og lastning af DNA i agarosegelen for Analyse
9

Overførsel 5 og 10 pi din prøve (r) fra deres reaktionsrørene til friske rør . I tilfælde af at du ønsker at bruge hele reaktionsblandingen , en frisk tube er ikke nødvendig.
10

Tilføj 0,2 x loading buffer til hver af dine friske prøverør indeholdende dit DNA-prøve til ilægning.

11

Fjern elektroforese kam langsomt , sikrer, at du ikke bryder gel eller skabe nogen plads mellem bunden af gelen og gelen bakken.
12

Tilføj fem 12 pi af en egnet DNA-markør til den første brønd skabt af elektroforese kam. Hvorvidt en DNA-markør er passende eller ikke afhænger af størrelsen af fragmenterne , du forventer fra din prøve .
13

Load fem til 10 pi dine prøver i de resterende brønde og der tilsættes samme mængde af den samme DNA-markør i den endelige godt.
14

Anbring elektroderne i elektroforese kammer ved at tilslutte ledningerne i de korrekte sokler i kammeret og indstilles elektroden 50 til 150 V.

15

Lad gelen køre i en til fire timer .
Analyse af resultater
16

Fjern gelen fra gelen kammer og det enten i en UV- plads til visuel identifikation , eller sted i en maskine , der er i stand til at tage et fotografi af gelen.
17

Mål markørerne afstand af migration i deres brønde. hoteltilbud
18

Plot afstandene mod størrelsen af ​​de bands på semilog millimeterpapir og tegne en bedste pasform linje .
19

Beregn afstandene dine ukendte bands .

20

Vurdere størrelsen af ​​dine ukendte bands ved at trække en linje op fra den afstand, som din ukendte bands , der opfylder den linje af bedste pasform.
21

Træk en streg fra dette mødested over til størrelse akse.
hoteltilbud