NBT assayprotokoller

NBT eller nitro blue tetrazolium er en kemisk forbindelse, der anvendes i biokemi og immunologi til påvisning af enzymet alkalisk phosphatase. Stoffet anvendes også ved diagnose test af kronisk granulomatøs sygdom , som påvirker immunodefense celler. NBT assayprotokoller inkluderer immunoblotting BCIP /NBT alkalisk fosfatasesubstratopløsning og detektion af galactosidase og alkalisk phosphatase aktiviteterne i væv. Immunoblotning

Immunoblotting er en teknik, der anvendes til påvisning af antistoffer , som er proteiner , der er involveret i immunodefense proces , siger Susan R. Haynes i " RNA - protein interaktioner Protokoller ". Dette omfatter anvendelsen af ​​NBT samt okseserumalbumin , primære antistoffer 9E10 , Coomassie farveopløsning , nitrocellulosemembraner , Tris-base pufferopløsning , ammonium per- sulfat, natriumdodecylsulfat og vandmættet buthanol .

BCIP /NBT Alkaline phosphatasesubstratopløsning

Teknikere forberede en løsning med tre dråber 1 procent 5- brom-4- chlor-3- indolylphosphat ( BCIP ) , tre dråber 1,5 procent NBT to dråber af det kemiske stof Levamisole og alkalisk phosphatase ( AP) puffer ved pH 9,5 , ifølge IHC Verden hjemmeside. Løsningen inkuberes derefter ved stuetemperatur og tilgængelig til brug.
Påvisning af Galactosidase og alkalisk fosfatase Aktiviteter i Tissue

galactosidaser er enzymer, der kan bryde den galactosid molekyle til stede i bakterierne Escherichia coli og andre organismer. Ifølge protokol Online , i løbet af denne protokol , biologer bruger rotte celleprøver behandlet med PBS-opløsning , glutaraldehyd og paraformaldyde . Derefter de forbereder brom -chlor- indolyl -galactopyranosid eller X -gal- reaktionspuffer for prøverne , ved hjælp af kaliumferrocyanid , magnesiumchlorid, natriumdeoxycholat og vaskemiddel Nonidet P -40. Teknikere kan bruge nitro blå tetrazolium (NBT ) i stedet for kaliumferrocyanid som et hurtigere alternativ . Celleprøver er senere observeret under mikroskop .
Hoteltilbud