Hvad er Gelelektroforese

Når et detergent, såsom natrium dodecylsulfonate (SDS ) sættes til et protein eller nukleinsyre , vil vaskemiddel associere med og udfolde ( denaturerede ) proteiner og nukleinsyre. Denatureringen af ​​proteiner gør det lettere at bestemme deres molekylvægt i elektroforese. Mængden af ​​prøve kræves typisk 100 til 500 nanogram per prøve båndet til proteiner og 5 til 100 ng pr bånd for nukleinsyrer i et samlet volumen på ca 25 til 40 mikroliter .
Gels hoteltilbud

En gel, typisk lavet af polyacrylamid eller agarose, kan være forberedt eller købt til at adskille disse proteiner. Gelen er meget ligesom gelatine. Det er for det meste vand , men er solid nok til at håndtere . Gelerne indeholder puffer for at kontrollere pH. Gelen er meget tynd (1 til 2 mm) og rektangulære . Den ene side ligner en kam med en masse af manglende tænder . De huller kaldes brønde.
Sample Loading

One steder gel i et kammer med buffer og denaturerede proteiner tilsættes til brøndene. Prøver af kendte molekylvægte tilsættes til de udvendige brønde. Geler fremstillet med varierende mængder af polyacrylamid. En lav gelstyrke ( 4 procent ) er bedre til at separere molekyler med høj molekylvægt , mens en højere gelstyrke ( 12 procent ) anvendes til højere molekylvægt molekyler. En gradient gel varierer i gel styrke og kan adskille en bred vifte af proteiner med tabet af nogle opløsning.
Elektromigration

Med anvendelse af en høj elektrisk spænding, de denaturerede proteiner bevæger sig mod bunden af ​​brønden . Jo højere vægten af proteinet , desto langsommere bevæger sig. Når elektricitet er slukket , proteinerne op med at bevæge . Man fjerner gelen fra kammeret og klipper den i en skål med farvestof. Organiske farvestoffer , såsom Coomassie blå eller metal farvestoffer anvendes til at farve proteiner mens fluorescerende farvestoffer , såsom ethidiumbromid bruges til nukleinsyrer.
Analyse

Med af resultater hoteltilbud fjernelse af overskydende farve , kan man se , at blandinger adskilles i bånd , der ligner stiger. Placeringen af ​​båndene er i forhold til den afstand, bevæget af standarder for at bestemme molekylvægten af prøven i hvert bånd. Gelen kan dehydratiseres med alkohol og tørres , så det kan gemmes. Så kan måles Farveintensiteten af bandet til at bestemme koncentrationen af proteinet i hvert bånd.
Protokol Development

Standardprotokoller er til rådighed for at arbejde med vel- kendte proteiner . Hvis en forsker arbejder med en ukendt prøve , kan gelen styrke, buffer type , pH , spænding , løbe tid, og bejdse alt skal optimeres for at opnå den bedste separation og signal.
protokoller