Sådan måler katalase Koncentrationer

Catalase er en biologisk ( organisk ) katalysator. Dette enzym er en af ​​de mest potente kendte katalysatorer og har gavnlige virkninger på det menneskelige legeme og er afgørende for liv. Catalase fungerer som en katalysator til at fremskynde nedbrydningen af ​​hydrogenperoxid. Hydrogenperoxid er en metabolisk biprodukt , der er giftig for cellerne hvis de ikke fjernes . Catalase hjælper med at nedbryde hydrogenperoxid i vand og ilt. Catalase hjælper også oxiderende andre giftstoffer såsom phenoler, myresyre , formaldehyd og alkoholer . Hvad du har brug
Two 110 ml chromogen i fosfatbuffer
300 pi substrat - 30% hydrogenperoxid
400 μL.HRP - peberrodperoxidase i fosfatbuffer
60 ml fosfat buffer
250 ml prøve fortynder tensid i fosfatbuffer
To 30 mL substrat fortynder fosfatbuffer
To 30 mL stopreagens - natriumazid
To hætteglas 160 U /hætteglas standard katalase
Spektrofotometer
10 ul justerbare pipetter
1 cm vejlængde spektrofotometriske kuvetter
1,5 ml polypropylen mikrorør med hætte
Reagensglas - 12x75 millimeter ( 2,5 ml hver)
Timer
Demineraliseret vand

Vis Flere Instruktioner
1

Forbered bestanden af ​​katalase , at du vil være at måle ved at tilsætte 200 mikroliter ( ul) deioniseret vand til katalasen koncentrationerne i 50 milliliter (ml) hætteglas . Niveauet for catalese koncentration bør være 160 enheder per milliliter ( U /ml).
2

Tilføj 30 pi fortyndet katalase i rør . Tilsæt 500 pi af substrat (hydrogenperoxid - 10mm H2O2 ) i hvert rør . Vær omhyggelig med ikke at plaske hydrogenperoxid , når man arbejder med det.
3

Inkubér enkelte rør i et minut ved stuetemperatur.
4

Tilføj 500 & mu ; L reagens til hvert hætteglas. Cap hvert hætteglas og blandes ved at vende hætteglasset op og ned. Må ikke hvirvle blandingen ryste hætteglasset eller røre det med en genstand .
5.

Tilsæt 20 pi af hver reaktionsblanding i reagensglassene . Tilsæt 2 ml af HRP- reagens i hvert reagensglas. Igen, blande opløsningen ved at vende reagensglassene flere gange .
6

Inkubér løsning igen, denne gang i 10 minutter ved stuetemperatur.
7.

Læs absorbansen niveau af opløsningen med et spektrofotometer . Spektrofotometeret måler lyset bølgelængder for at bestemme præcis, hvad stoffer er til stede og og hvilke koncentrationer. Denne metode vil give en nøjagtig måling af katalase koncentrationer. Oplysningerne er nyttig i forbindelse med interaktionen af ​​katalase med hydrogenperoxid, som i dette eksperiment, og som foregår naturligt i den menneskelige krop.
Hoteltilbud